какое обследование нужно назначить для этиологического подтверждения диагноза гриппа
Грипп и ОРВИ. Лабораторная диагностика
Грипп и другие острые респираторные вирусные инфекции (ОРВИ) – это всегда неприятно. Мы наиболее подвержены этим заболеваниям в холодное время года.
По данным Роспотребнадзора в общей структуре инфекционной заболеваемости грипп и другие респираторные вирусные инфекции составляют до 90% (примерно 30 млн. случаев в год). По информации НИИ гриппа Министерства Здравоохранения России эпидемия гриппа в этом году начнется достаточно поздно – в декабре, в осенний период будет наблюдаться умеренная циркуляция «не гриппозных» возбудителей ОРВИ.
Первичное размножение респираторных вирусов происходит в слизистой оболочке верхних дыхательных путей, поэтому начало болезни сходно по своей клинической картине. В дальнейшем развиваются различные симптомы, характерные для конкретного возбудителя. Обычно ОРВИ протекают легче, чем грипп, который часто принимает эпидемическое распространение.
Тем не менее, иногда при инфицировании респираторными вирусами и вирусами гриппа могут развиваться тяжелые формы инфекции с осложнениями. Наибольшему риску подвержены дети, беременные женщины, люди старше 65 лет, а также медработники, работники детских и закрытых учреждений. Кроме этого, если у человека уже есть проблемы с сердцем, диабет, хронические заболевания печени и почек, заболевания легких, инфекция может усугубить эти проблемы.
В случае заболевания очень важно назначить своевременное и эффективное лечение, направленное не только на устранение симптомов заболевания, но и на возбудителя.
Быстрая и точная лабораторная диагностика имеет большое значение для идентификации возбудителей и является важным моментом для назначения терапии.
Вирусологическая лаборатория ФБУЗ проводит исследования различных видов клинического материала на обнаружение возбудителей гриппа и ОРВИ.
Возбудители гриппа и ОРВИ, определяемые методом ПЦР:
Возбудители гриппа и ОРВИ, определяемые методом МФА:
Диагностические исследования выполняются на современном оборудовании высококвалифицированным персоналом по доступным ценам. Забор материала проводится в медицинских учреждениях.
Провести исследование можно по адресу: г. Липецк, ул. Гагарина, д. 60а. Часы работы с 08:00 до 16:00; выходной: суббота, воскресенье; тел. (4742) 308-706.
* При подготовке информации использованы материалы еженедельного бюллетеня информационного мониторинга ситуации по гриппу ФБУН ГНЦ вирусологии и биотехнологии «Вектор» (выпуск №287, 288).
Ссылки по теме:
© Федеральное бюджетное учреждение здравоохранения
«Центр гигиены и эпидемиологии в Липецкой области», 2014-2021 гг.
При использовании материалов сайта, ссылка на сайт обязательна.
Адрес: 398002, г. Липецк, ул. Гагарина, 60а.
Лабораторная диагностика гриппа и ОРВИ
Известно более 200 разновидностей вирусов, избирательно поражающих респираторный тракт человека (возбудителей ОРВИ).
У большинства возбудителей ОРВИ первичное размножение вирусов происходит в слизистой оболочке дыхательной системы, поэтому клиническая картина сходная, заболевание протекает в виде ринита, ринофарингита, как правило, в легкой форме. У детей раннего возраста вирусы могут поражать нижние отделы респираторного тракта, и болезнь протекает в более тяжелой форме в виде бронхитов, бронхиолитов, пневмоний. Наиболее тяжело протекающей острой вирусной респираторной инфекцией является грипп, который часто принимает эпидемическое распространение, характеризуется явлениями общей интоксикации, лихорадкой, поражением дыхательного тракта, нервной и сердечно-сосудистой систем. Максимальное число тяжелых форм течения инфекции наблюдается в период пандемий, обусловленных новым вариантом вируса гриппа.
Лабораторная диагностика – ранняя и ретроспективная – проводится для подтверждения клинического диагноза, дифференциации гриппа от ОРВИ другой этиологии и для эпидемиологических целей. Вирусологическая лаборатория ФГУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в Курской области», входящая в состав опорной базы Федерального центра по гриппу и острым респираторным вирусным инфекциям, проводит исследования с целью этиологической расшифровки заболеваемости гриппом и ОРВИ, в том числе в организованных коллективах детей и взрослых, проведение лабораторных исследований в целях расшифровки региональной структуры заболеваемости гриппом и ОРВИ. Лаборатория оснащена современным оборудованием, имеет необходимые диагностические препараты, укомплектована высококвалифицированными специалистами.
Лаборатория оуществляет диагностику с помощью экспресс-методов, вирусологических и серологических методов исследования. Быстрая (экспресс) диагностика гриппа и ОРВИ:
2) метод полимеразной цепной реакции (ПЦР)- основан на обнаружении в клинических пробах генетического материала вирусов (РНК или ДНК)- является наиболее современным, высокочувствительным методом.
Исследуемый материал: мазки из носа и зева, взятые в первые 3 дня и не позднее 5 дня болезни, секционный материал. Определяемые возбудители:
— вирусы пандемического высокопатогенного гриппа типа А (H1N1)
— вирусы гриппа типа А
Этот метод отличается трудоемкостью и длительностью и используется, главным образом, для эпидемиологических и научных целей (изучается изменчивость вирусов, что помогает прогнозировать эпидемические подъемы гриппа, отбираются актуальные штаммы, пригодные для изготовления вакцин) Исследуемый материал: мазки из носа и зева (в первые 3 дня и не позднее 5 дня болезни).
— вирусы гриппа типа А (разные серотипы)
— вирусы гриппа типа В Серологическая диагностика является ретроспективной. Она выявляет прирост титров антител к возбудителям заболевания в парных сыворотках крови, что позволяет установить точную этиологию даже при отрицательных результатах других методов лабораторной диагностики, а также при бессимптомном или атипичном течении гриппа, широко применяется и для эпидемиологических целей. Исследуемый материал: сыворотки крови, взятые в начале заболевания и через 10- 14 дней.
Возбудители к которым определяется прирост титров антител:
— вирусы сезонного гриппа типа А (H1N1)
— вирусы парагриппа 1, 2, 3 типов
Временные методические рекомендации «Организация и проведение лабораторной диагностики заболеваний, вызванных высокопатогенными штаммами вируса гриппа типа А (ВГА), у людей»
Государственное санитарно-эпидемиологическое нормирование
Российской Федерации
4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ.
БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
Организация и проведение лабораторной диагностики заболеваний, вызванных высокопатогенными штаммами вируса гриппа типа А (ВГА), у людей
Временные методические рекомендации
Москва
2009
4.2.МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ.
БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
Организация и проведение лабораторной диагностики заболеваний, вызванных высокопатогенными штаммами вируса гриппа типа А (ВГА), у людей
Временные методические рекомендации
1. Разработаны: Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (Г.Г. Онищенко, Е.Б. Ежлова, Ю.В. Дёмина, А.А. Мельникова, Г.Ф. Лазикова, Н.В. Шеенков); ФГУЗ ЦНИИ эпидемиологии Роспотребнадзора (Шипулин Г.А., Яцышина С.Б.), ФГУН ГНЦ ВБ «Вектор» Роспотребнадзора (Дроздов И.Г., Сергеев А. Н., Агафонов А.П., Шиков А.Н., Сергеев А.Н., Демина О.К., Суслопаров И.М., Терновой В.А.).
2. Утверждены и введены в действие Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко «___»________ 2009 г.
3. Введены впервые.
Список сокращений
Биобезопасность – биологическая безопасность
Содержание
3. Координация деятельности учреждений, осуществляющих диагностику ВГА ………………………………………….. ………….
4. Правила сбора клинического (секционного) материала ………….
5. Упаковка и транспортирование образцов…………………….………
6. Порядок проведения лабораторных исследований …………………..
7. Обеспечение биобезопасности при проведении лабораторных диагностических исследований ………………………………………….
8. Библиографические источники ………………………………………
Приложение 1 (обязательное). Координаты референс-лаборатории, осуществляющей дополнительное подтверждающее тестирование ВГА ……………………………………………………………………….
Приложение 2 (обязательное).Способы взятия, условия хранения и транспортирования клинического материала для лабораторной диагностики ВГА ………………………………………………………
Приложение 3 (обязательное). Перечень вирусологических лабораторий и лабораторий учреждений противочумной системы Роспотребнадзора, проводящих первичный скрининг на ВГА ……….
Приложение 4 (справочное).Стабилизирующая среда для хранения и транспортирования материала
УТВЕРЖДАЮ
Руководитель Федеральной службы
по надзору в сфере защиты прав
потребителей и благополучия человека,
Главный государственный санитарный врач Российской Федерации
«____» _______ 2009 года
Дата введения: с момента утверждения
4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ.
БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
Организация и проведение лабораторной диагностики заболеваний, вызванных высокопатогенными штаммами вируса гриппа типа А (ВГА), у людей
Временные методические рекомендации
1.1. В настоящих методических рекомендациях определены порядок сбора, упаковки, хранения, транспортирования и выполнения лабораторных исследований биологического материала от больных (и умерших) пациентов при лабораторной диагностики заболеваний, вызванных высокопатогенными штаммами вируса гриппа типа А (ВГА).
1.2 Методические рекомендации предназначены для специалистов органов и учреждений Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, а также могут быть использованы лечебно-профилактическими и другими организациями, независимо от организационно-правовой формы.
2. Общие требования
Все работы по сбору, транспортированию и подготовке проб клинического и секционного материала осуществляют в строгом соответствии с требованиями МУ 3.4.1028 – 01 «Организация и проведение первичных мероприятий в случаях выявления больного (трупа), подозрительного на заболевания карантинными инфекциями, контагиозными вирусными геморрагическими лихорадками, малярией и инфекционными болезнями неясной этиологии, имеющими важное международное значение», СП 1.3. 1285 – 03 «Безопасность работы с микроорганизмами I-II групп патогенности (опасности)», СП 1.2.036-95 «Порядок учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов I-IV групп патогенности», МУ 1.3.1794-03 «Организация работы при исследованиях методом ПЦР материала, инфицированного микроорганизмами I-II групп патогенности».
3. Координация деятельности учреждений, осуществляющих диагностику ВГА
3.1. При эпидемическом неблагополучии в России и за рубежом по ВГА и при отсутствии лабораторно подтвержденных случаев заболевания людей на данной территории:
3.1.1 Забор материала от пациентов (или умерших) с подозрением на инфекцию ВГА проводят в лечебно-профилактических учреждениях (ЛПУ) после изоляции больного.
3.1.2 Первичное исследование материала от больного осуществляют методами ОТ-ПЦР, ПЦР в режиме реального времени или методом ПЦР с флуоресцентной детекцией результата по конечной точке на базе вирусологических лабораторий ФГУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» в субъектах Российской Федерации или лабораторий учреждений противочумной системы Роспотребнадзора (в соответствии с перечнем – приложение 3).
Исследование проводят методами ОТ-ПЦР или РТГА с антигенами на субтипы вируса H1N1, H3N2 (пр-ва НИИ гриппа, Санкт-Петербург).
При исследовании методом ОТ-ПЦР анализ проводится в два этапа:
Ко второму этапу анализа следует приступать при получении положительного результата по обнаружению вируса гриппа А на первом этапе.
Интерпретация результатов исследования
Обнаружив грипп А с помощью тестов «АмплиСенс Influenza virus A/B-FL» или «АмплиСенс Influenza virus A/H5N1-FL» (в реакции с ПЦР-смесь-1-FEP/FRTInfluenzavirusA), и получив отрицательные результаты с тестом «АмплиСенс® InfluenzavirusA-тип-FL», можно сделать вывод, что в образце присутствует нехарактерный для популяции людей вирус гриппа А (свиней или птиц).
Такие образцы (изоляты) без проведения выделения возбудителя на биосистемах культивирования в ФГУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» в субъектах Российской Федерации требуют детального исследования в одной из референс-лабораторий (приложение 1), так как они являются потенциально пандемически-опасными.
В случае положительного результата второго этапа анализа больному ставится диагноз «сезонный грипп» и может быть проведено в ФГУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» в субъектах Российской Федерации выделения возбудителя на биосистемах культивирования.
При наличии теста для идентификации вируса гриппа свиней А/H1 (например комплект реагентов «АмплиСенс® Influenza virus А/H1-swine-FL» производства ФГУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора) исследование проводится после получения положительного результата на первом этапе (обнаружение вируса гриппа А).
В случае положительного результата при исследовании с антигенами на субтипы вируса H1N1, H3N2 (пр-ва НИИ гриппа, Санкт-Петербург) больному ставится диагноз «сезонный грипп».
3.1.3 При выявлении положительных результатов первичного исследования материал от больного отправляется на подтверждающее тестирование в референс – лабораторию (в соответствии приложением 3).
В связи с тем, что вследствие мутаций вновь появившиеся высокопатогенные штаммы вируса гриппа свиней изменили свои антигенные свойства, на настоящем этапе детекция вируса методом иммунофлуоресцирующих антител (МФА) может быть не эффективной (давать ложноположительные и ложноотрицательные результаты).
3.1.4 Подтверждающее тестирование положительных образцов осуществляется в референс-лаборатории (приложение 1) с обязательным использованием двух методов: вирусологического исследования (выделение вируса должно осуществляться в условиях лаборатории с уровнем защиты BSL-3) и одного из вариантов ПЦР. Результаты исследований в каждом случае передают в ЛПУ, направившее материал, и в учреждения Роспотребнадзора (управление Роспотребнадзора по субъекту Российской Федерации и ФГУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» в субъекте Российской Федерации) в день получения результата.
3.1.5. При получении положительных результатов подтверждающего тестирования референс-лаборатория проводит изоляцию вируса, изучение его свойств и депонирование в Национальном центре верификации диагностической деятельности, осуществляющий функции государственной коллекции, расположенной на базе ФГУН ГНЦ ВБ «Вектор».
3.2. При наличии лабораторно подтвержденных случаев заболевания людей ВГА на данной территории и при наличии следующих данных эпидемиологического анамнеза:
— контакт в течение срока менее чем 7 дней до появления первых клинических признаков с больным, у которого лабораторно подтверждено инфицирование высокопатогенными штаммами гриппа;
— контакт в течение срока менее чем 7 дней до появления первых клинических признаков с больным острым респираторным заболеванием неясной этиологии, в том числе закончившимся летально;
— наличие профессионального риска инфицирования (врачи-инфекционисты, сотрудники подразделений, работающих с вирусом гриппа)
3.2.1 Забор материала проводит специально обученный персонал лечебно-профилактических учреждений (ЛПУ).
3.2.2 Первичное исследование материала осуществляют на базе вирусологических лабораторий ФГУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» в субъектах Российской Федерации или лабораторий учреждений противочумной системы Роспотребнадзора (в соответствии с перечнем – приложение 3).
3.2.3 Подтверждающее тестирование положительных образцов осуществляется в референс-лаборатории(приложение 1) с обязательным использованием двух методов: вирусологического исследования (выделение вируса должно осуществляться в условиях лаборатории с уровнем защиты BSL-3)и одного из вариантов ПЦР. Результаты исследований в каждом случае передают в ЛПУ, направившее материал, и в учреждения Роспотребнадзора (управление Роспотребнадзора по субъекту Российской Федерации и ФГУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» в субъекте Российской Федерации) в день получения результата.
3.3. При исследовании образца от больного, имеющего в анамнезе контакт с лицами, которым был поставлен лабораторно подтвержденный диагноз «грипп, вызванный высокопатогенным штаммом вируса гриппа свиней»:
3.3.1 Забор материала проводят в ЛПУ при подозрении на заболевание ВГА.
3.3.2 Первичное исследование материала осуществляют на базе вирусологических лабораторий ФГУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии» в субъектах Российской Федерации или лабораторий учреждений противочумной системы Роспотребнадзора (в соответствии с перечнем – приложение 3) с использованием ОТ-ПЦР.
3.3.3 Обязательное подтверждающее тестирование в референс-лаборатории не проводится. Направление материала в референс-лабораторию осуществляется в случаях возникновения противоречивых результатов при первичном тестировании.
4 Правила сбора клинического (секционного) материала
4.1 Сбор клинического материала и его упаковку осуществляет медицинский работник лечебно-профилактического учреждения, обученный требованиям и правилам биологической безопасности при работе и сборе материала, подозрительного на зараженность ВГА. Забор производят в стерильные одноразовые флаконы, пробирки, контейнеры, стерильными инструментами. Все виды работ проводят с соблюдением противоэпидемического режима, согласно СП 1.3 1285 – 03 «Безопасность работы с микроорганизмами I-II групп патогенности (опасности)».
4.2 Упаковка, маркирование, условия хранения и транспортирования материала для проведения лабораторной диагностики ВГА должны соответствовать требованиям СП 1.2.036-95 «Порядок учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов I-IV групп патогенности» и настоящих методических указаний (приложение 3).
4.3. Для исследования забирают следующие виды клинического материала:
Целесообразно также включать в исследование аспираты из трахеи, бронхоальвеолярный лаваж и биоптаты легких при возможности их забора. Данные процедуры осуществляет подготовленный медицинский персонал в соответствии с МУ 3.4.1028 – 01 «Организация и проведение первичных мероприятий в случаях выявления больного (трупа), подозрительного на заболевания карантинными инфекциями, контагиозными вирусными геморрагическими лихорадками, малярией и инфекционными болезнями неясной этиологии, имеющими важное международное значение».
Перечисленные выше процедуры по забору клинического материала обученный медицинский персонал осуществляет в средствах индивидуальной защиты органов дыхания (респиратор типа ШБ-1 или РБ «Лепесток-200»), защитных очках или щитках для защиты лица, бахилах, двойными резиновыми перчатками. После процедуры отбора материала перчатки обрабатываются растворами дезинфицирующих средств, руки после снятия перчаток обрабатываются антисептиками в соответствии с СП 1.3. 1285 – 03 «Безопасность работы с микроорганизмами I-II групп патогенности (опасности)».
Выбор времени забора клинического материала очень важен, так как наиболее высокое содержание вируса в дыхательных органах человека регистрируется в течение первых четырех дней после появления признаков заболевания. Образцы должны быть собраны в течение 3 суток после появления клинических признаков, указанных в п. 6.1.
Для постмортальной диагностики используют аутоптаты легких, трахеи и селезенки.
От одного больного должно забираться не менее трех видов клинического материала. Обязательно следует забирать мазки из полости носа и ротоглотки и носоглоточное отделяемое. Каждый образец материала помещают в отдельную транспортную емкость.
4.4 Сбор материала производят в пробирки со стабилизирующей средой, приготовленной согласно приложению 4, и/или в пробирки с транспортной средой, предоставляемой (или рекомендуемой) фирмой-производителем тест-систем.
4.5 Отправку материала в лабораторию осуществляют в транспортной таре со стабилизирующей средой (приложение 4).
5. Упаковка и транспортирование образцов
5.1 Все материалы, доставляемые в лабораторию, должны быть герметично упакованы в соответствии с СП 1.2.036-95 «Порядок учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов I-IV групп патогенности»:
1) в транспортную емкость (плотно закрывающиеся пластмассовые пробирки или флаконы с завинчивающимися крышками, проверенные на герметичность); плотно закрытый верхний конец транспортной емкости вместе с крышкой герметизируют различными пластификаторами (парафин, парафильм и др.); емкость маркируют.
2) в плотный полиэтиленовый пакет подходящего размера с ватой (или другим гигроскопичным материалом) в количестве достаточном для адсорбции всего образца в случае его утечки; полиэтиленовый пакет следует герметично заклеить или запаять.
5.1.1. В отдельный полиэтиленовый пакет вкладывают бланк направления с указанием: наименование направляющего учреждения, ФИО больного, возраст, место жительства, предварительный диагноз, эпидемиологический анамнез, вид материала, дата и время взятия материала.
5.1.2 Пакеты с образцами от одного пациента вместе с направлением упаковывают во второй плотный полиэтиленовый пакет. Не допускается упаковывание образцов материалов от разных людей в один и тот же пакет.
5.2 Герметично закрытые полиэтиленовые пакеты помещают в термоизолирующий плотно закрывающийся контейнер (термос), приспособленный для транспортирования биологических материалов.
5.2.1. В термоконтейнеры и термосы помещают охлаждающие элементы или пакеты со льдом. К наружной стенке термоконтейнера или термоса прикрепляют этикетку с указанием вида материала, условий транспортирования, названия пункта назначения. Сроки и условия транспортирования упакованных проб клинического материала указаны в приложении 2.
5.3 Транспортирование проб клинического материала в референс-лабораторию, вирусологические лаборатории и лаборатории учреждений противочумной системы Роспотребнадзора осуществляется нарочным (и), информированным о правилах доставки материала в соответствии с п.3.4. СП 1.2.036-95.
6. Порядок проведения лабораторных исследований
7. Обеспечение биобезопасности при проведении лабораторных диагностических исследований
8 Библиографические источники:
Приложение 1 (обязательное)
РЕФЕРЕНС-лаборатории, осуществляющие ДОПОЛНИТЕЛЬНОЕ подтверждающее тестирование ВГА
По этим телефонам можно получить любую дополнительную разъясняющую информацию.
Приложение 2 (обязательное)
Способы взятия, условия хранения и транспортирования клинического материала для лабораторной диагностики ВГА
1. МАЗКИ ИЗ РОТОГЛОТКИ
Мазки берут сухими стерильными зондами с ватными тампонами вращательными движениями с поверхности миндалин, небных дужек и задней стенки ротоглотки после предварительного полоскания полости рта водой.
После взятия материала тампон (рабочую часть зонда с ватным тампоном) помещают в стерильную одноразовую пробирку с 500 мкл стерильного 0,9 % раствора натрия хлорида или раствора фосфатного буфера. Конец зонда отламывают или отрезают с расчетом, чтобы он позволил плотно закрыть крышку пробирки. Пробирку с раствором и рабочей частью зонда закрывают.
1.2. Предобработка проб
Не требуется.
1.3. Метод исследования
1.4. Условия хранения материала
При температуре от 2 до 8°С – в течение трех суток.
При температуре минус 70°С или в жидком азоте – длительно.
Допускается только однократное замораживание-оттаивание материала. Температура хранения минус 200С не допускается.
1.5. Условия транспортирования материала
В специальном термоконтейнере с охлаждающими элементами или в термосе со льдом:
Температура транспортировки минус 200С допускается только с учетом однократного замораживания и транспортировки без размораживания не более 4 дней.
2. Мазки из полости носа
Мазки (слизь) берут сухими стерильными зондами с ватными тампонами. Зонд с ватным тампоном вводят легким движением по наружной стенке носа на глубину 2-3 см до нижней раковины. Затем зонд слегка опускают книзу, вводят в нижний носовой ход под нижнюю носовую раковину, делают вращательное движение и удаляют вдоль наружной стенки носа.
Для ПЦР-анализа. После взятия материала тампон (рабочую часть зонда с ватным тампоном) помещают в стерильную одноразовую микропробирку с 500 мкл стерильного 0,9 % раствора натрия хлорида или раствора фосфатного буфера. Конец зонда отламывают или отрезают с расчетом, чтобы он позволил плотно закрыть крышку пробирки. Пробирку с раствором и рабочей частью зонда закрывают.