Указанных делеций не обнаружено что это значит

Что такое делеция, структурные хромосомные мутации?

Статья опубликована: 2018-12-25

Рейтинг: 5 из 5

Геном человека устроен таким образом, что для нормальной жизни у нас должно быть ровно 23 пары хромосом. Хромосомы существуют именно парно, потому что одна хромосома в паре приходит от мамы, а другая от папы. Нарушение в числе хромосом приводит к тяжелым заболеваниям, например, синдрому Дауна. Однако, количество хромосом может быть в норме, но все равно человек имеет аномалии в развитии, которые не совместимы с нормальной и долгой жизнью.

Дело в том, что могут быть отклонение в самой структуре хромосомы. Из хромосомы выпадают участки. Такое явление называется делецией. Делеция происходит от лат. deletio что значит уничтожение. Такая аномалия может возникать в результате неравного кроссинговера или при разрыве хромосомы.

Признаки делеционного синдрома

Делеции или микроделеции могут вообще внешне не проявляться. Человек может всю жизнь прожить с этим синдромом и не знать о его существовании. Заболевание может обнаружится, например, когда возникнет необходимость завести ребенка, но попытки будут безуспешными.

Существуют делеции с явно выраженными внешними признаками:

Причины появления делециий

Существует несколько причин, при которых возможно развитие делеционного синдрома:

Диагностика синдромов

Выявить наличие делеций возможно на ранних сроках беременности. Уже на 9-ой недели по венозной крови матери можно провести ДНК анализ и диагностировать заболевание. Такое генетическое исследование называется неинвазивный пренатальный ДНК тест. Тест проводится без направления врача, т. к. не имеет противопоказаний и побочных эффектов.

Генетический центр “ДТЛ” выполняет НИПТ тесты уже более 4 лет. В сотрудничестве с ведущими мировыми лабораториями в области пренатальной диагностики нами проведено уже болен 1000 подобных исследований.

Источник

Указанных делеций не обнаружено что это значит

Генетическое исследование, которое позволяет выявить нарушения сперматогенеза (олигозооспермию и азооспермию), связанные с образованием мужских половых клеток. Оно заключается в анализе структуры AZF-локуса Y-хромосомы; входящие в AZF-локус гены определяют нормальное протекание сперматогенеза.

Исследование помогает выявить проблемы по мужской линии при планировании беременности и принять решение о необходимости вспомогательных репродуктивных технологий.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Буккальный (щечный) эпителий, венозную кровь.

Как правильно подготовиться к исследованию?

Подготовки не требуется.

Общая информация о заболевании

Тестикулярная недостаточность и, как следствие, сперматогенные нарушения могут быть вызваны любыми причинами, за исключением заболеваний гипоталамо-гипофизарной системы и обструкции мужских половых путей. Это наиболее частая форма снижения мужской фертильности. Тестикулярная недостаточность имеет различное происхождение, но проявляется как тяжелая олигоастенотератозооспермия или необструктивная азооспермия.

Частыми причинами мужского бесплодия являются нарушения, связанные со структурой и количеством сперматозоидов, влияющие на их подвижность и способность к оплодотворению. До 30 % необструктивной азооспермии и тяжелой олигозооспермии вызваны микроделециями, расположенными в Y-хромосоме в области Yq11.2.

Микроделеции длинного плеча Y-хромосомы встречаются с частотой примерно 1 на 1000-1500 мужчин и являются одной из наиболее частых генетических причин тяжелых форм нарушения сперматогенеза.

Люди обычно имеют 46 хромосом в каждой клетке. Две из 46 – половые – X и Y. У женщин две Х-хромосомы (46, XX), а у мужчин – одна Х-хромосома и одна Y-хромосома (46, XY). Так как только мужчины имеют Y-хромосому, ее гены, как правило, участвуют в определении мужского пола.

В дистальной части Yq11.2 идентифицирован локус AZF, получивший название «фактор азооспермии». Он разделен на 3 участка – AZFa, AZFb и AZFc, – и в каждом из них были идентифицированы гены, участвующие в контроле сперматогенеза.

Входящие в AZF-локус гены определяют нормальное протекание сперматогенеза; при изменении генетической структуры AZF-локуса образование мужских половых клеток может серьезно нарушиться.

Микроделеции возникают в результате сложных перестроек Y-хромосомы и при обмене участками между половыми хромосомами в процессе мейоза.

AZF-делеции обнаруживают в среднем у 10-12 % мужчин с азооспермией и у 8-9 % мужчин с олигозооспермией тяжелой степени.

Делеции в локусе AZF могут быть полными, т. е. целиком удаляющими один AZF регион или более, и частичными, когда они не полностью захватывают какой-либо из трех его регионов. Практически во всех случаях полные AZF-делеции являются мутациями de novo (т. е. вновь возникшими мутациями, а не унаследованными) и приводят к азооспермии или олигозооспермии тяжелой степени.

Наиболее частым типом полных (классических) AZF-делеций являются полные AZFc-делеции, доля которых составляет 65-70 % от всех полных AZF-делеций.

Второе место по частоте встречаемости (15-20 %) занимают делеции, захватывающие регионы AZFc и/или AZFb (AZFb+c- и AZFb-делеции).

Реже всего (5-10 %) выявляют делеции AZFa-региона, и обычно они ассоциированы с синдромом «только клетки Сертоли», при котором в семенных канальцах отсутствуют предшественники сперматозоидов и присутствуют только клетки Сертоли.

Центральное место в генетическом контроле развития по мужскому типу принадлежит SRY (Sex-determining Region Y) – гену мужского пола, который регулирует экспрессию других генов. Он кодирует семенник-определяющий транскрипционный фактор (TDF/Tdf), стимулирующий развитие семенников из зачатка гонады, исходно одинаковой у зародышей обоих полов. Именно в этом гене обнаружено наибольшее количество мутаций, связанных с дисгенезией гонад и/или инверсией пола. При отсутствии участка хромосомы, содержащего ген SRY, процесс развития эмбриона нарушается на стадии дифференцировки гонад – фенотип будет женский при мужском кариотипе 46, ХУ.

Для AZF-делеций прослеживается довольно четкая зависимость степени нарушения сперматогенеза от размера и локализации делеций, что может иметь прогностическое значение в плане возможности получения сперматозоидов, пригодных для программ экстракорпорального оплодотворения.

Отсутствие всего локуса AZF, а также делеции, целиком захватывающие регионы AZFa и/или AZFb, указывают на невозможность получения сперматозоидов.

Практически у всех пациентов с делециями AZFb или AZFb+c отмечают азооспермию вследствие тяжелых нарушений сперматогенеза (синдрома «только клетки Сертоли»).

При полных делециях региона AZFc проявления варьируются от азооспермии до олигозооспермии. В среднем у 50-70 % пациентов с делецией, целиком захватывающей AZFс регион, удается получить сперматозоиды, пригодные для искусственного оплодотворения. При частичных AZFс делециях проявления варьируются от азооспермии до нормозооспермии.

Когда назначается исследование?

Что означают результаты?

Рекомендуемая литература

Источник

Указанных делеций не обнаружено что это значит

ООО «НПФ ДНК-Технология», Москва, Россия, 117587; ФГБОУ ДПО РМАНПО Минздрава России, Москва, Россия

ФГБУ «Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии им. акад. В.И. Кулакова» Минздрава России, Москва, Россия

Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии им. акад. В.И. Кулакова, Москва

Клиника репродуктивной медицины МАМА, Москва

НИИ урологии Минздравсоцразвития РФ, Москва

ООО «НПФ ДНК-Технология», Москва, Россия, 117587

ФГБУ «Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии им. акад. В.И. Кулакова» Минздрава России, Москва, Россия

Спектр делеций фактора азооспермии (AZF) у мужчин с нормальным и нарушенным сперматогенезом

Журнал: Проблемы репродукции. 2017;23(4): 109-113

Зобкова Г. Ю., Баранова Е. Е., Донников А. Е., Мсхалая Г. Ж., Залетова В. В., Кошкина Т. Е., Трофимов Д. Ю. Спектр делеций фактора азооспермии (AZF) у мужчин с нормальным и нарушенным сперматогенезом. Проблемы репродукции. 2017;23(4):109-113.
Zobkova G Yu, Baranova E E, Donnikov A E, Mskhalaia G Zh, Zaletova V V, Koshkina Т Е, Trofimov D Yu. Range of azoospermia factor (AZF) deletions in men with normal and disturbed spermatogenesis. Russian Journal of Human Reproduction. 2017;23(4):109-113.
https://doi.org/10.17116/repro2017234109-113

ООО «НПФ ДНК-Технология», Москва, Россия, 117587; ФГБОУ ДПО РМАНПО Минздрава России, Москва, Россия

Цель исследования — изучение преимущества использования расширенной панели STS-маркеров при диагностике делеций региона AZFY-хромосомы. Материал и методы. В исследовании приняли участие 205 мужчин из бесплодных супружеских пар. По данным анализа эякулята, который проводился в соответствии с рекомендациями ВОЗ 2010 г., определены две группы: 143 пациента с азооспермией и олигозооспермией (концентрация менее 5 млн в 1 мл) составили основную группу и 62 пациента с нормозооспермией — контрольную. Всем мужчинам был проведен молекулярно-генетический анализ для выявления делеций AZF по наличию следующих STS-маркеров: AZFa: sY86, sY84, sY615; AZFb: sY127, sY134, sY142; AZFc: sY242, sY254, sY1291, sY255, sY1192, sY1197, sY1206, sY1125 методом полимеразной цепной реакции в реальном времени. Результаты. Среди мужчин с азооспермией и олигозооспермией (основная группа) делеции AZF: sY127, sY134, sY142, sY242, sY254, sY1291, sY255, sY1192, sY1197, sY1206, sY1125 были выявлены у 32 (22%). Наибольшая частота делеций в группе с олигозооспермией наблюдалась для двух маркеров: sY1192 — в 20,98% случаев, причем изолированно данная делеция встречалась в 11% случаев, sY1291 — в 9,79%, изолированно данная делеция встретилась только у одного пациента. Изолированные делеции этих участков также встречаются и у пациентов с нормозооспермией: sY1192 — у 8,06%, sY1291 — у 3,23%. Выявленные различия между группами не достигают статистической достоверности (критерий χ2). Заключение. Делеции маркеров sY1192 и sY1291 встречались у мужчин как с нарушением сперматогенеза, так и с нормозооспермией. Причем делеция sY1192 изолированно встречается в обеих группах практически с одинаковой частотой 11 и 8,06% соответственно. В связи с этим клиническая значимость изолированной делеции маркера sY1192 представляется сомнительной. Делеция маркера sY1291 в 3 раза чаще встречалась в группе мужчин с нарушенным сперматогенезом.

ООО «НПФ ДНК-Технология», Москва, Россия, 117587; ФГБОУ ДПО РМАНПО Минздрава России, Москва, Россия

ФГБУ «Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии им. акад. В.И. Кулакова» Минздрава России, Москва, Россия

Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии им. акад. В.И. Кулакова, Москва

Клиника репродуктивной медицины МАМА, Москва

НИИ урологии Минздравсоцразвития РФ, Москва

ООО «НПФ ДНК-Технология», Москва, Россия, 117587

ФГБУ «Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии им. акад. В.И. Кулакова» Минздрава России, Москва, Россия

По определению ВОЗ, бесплодие — неспособность сексуально активной, не использующей контрацепцию пары добиться беременности в течение одного года [1]. Бесплодие является важной медицинской, социальной, демографической и экономической проблемой современности. От бесплодия страдают 15% всех пар репродуктивного возраста в мире и даже после проведенной терапии 5% пар все еще не могут завести желанного ребенка [2]. Именно поэтому данная проблема является весьма актуальной.

Несмотря на то что зачастую стигматизации подвергаются именно женщины, вклад мужского и женского факторов в структуру бесплодного брака примерно равноценен [3].

Бесплодие обычно проявляется тогда, когда оба партнера субфертильны. Это объясняет тот факт, почему у бесплодной пары часто имеется сосуществование мужских и женских факторов. В случае же наличия только одного патологического фактора другой партнер может компенсировать этот недостаток своего менее фертильного партнера [4].

Причинами мужского бесплодия могут быть врожденные и приобретенные аномалии органов мочеполовой системы, варикоцеле, эндокринные нарушения, инфекции мочевых и половых путей, генетические аномалии и иммунологические факторы, прием лекарственных препаратов, ранее перенесенные заболевания, нарушение эрекции и/или эякуляции.

В свою очередь, по некоторым данным [5], генетические факторы обусловливают до 50% случаев тяжелого нарушения сперматогенеза. Около 15% из них занимают микроделеции в локусе фактора азооспермии (AZF).

Этот локус расположен в длинном плече хромосомы Y, разделяется на три субрегиона: AZFa, AZFb и AZFc и включает гены, принимающие непосредственное участие в процессе развития, созревания и формирования сперматозоидов (см. рисунок).

Схематическое изображение локуса AZF.

Делеции AZF могут быть как полными, затрагивающими один, два или все три AZF субрегиона, так и частичными, когда отсутствует какой-либо участок AZF субрегиона. Клинические проявления делеций варьируют в зависимости от длины участка и его локализации.

После нескольких лет клинических исследований были установлены некоторые особенности AZF делеций.

Делеции наиболее часто возникают в субрегионе AZFc (приблизительно 65—70%), далее — в субрегионах AZFb и AZFb+c или AZFa+b+c (25—30%), в то время как делеции в субрегионе AZFa встречаются значительно реже (5%) [2].

Полная делеция субрегионов AZFa ассоциируется с азооспермией и синдромом «только клеток Сертоли». Делеции, охватывающие весь регион AZFb, связаны с азооспермией, возникшей в результате прекращения мейоза и созревания сперматозоидов на стадии сперматоцитов. В случаях полной утраты субрегионов AZFa и AZFb биопсия яичка, как правило, не позволяет получить зрелые сперматозоиды.

Полная делеция субрегиона AZFc приводит к различному фенотипу, от азооспермии до олигозооспермии [6]. При этом у пациентов с делециями в локусе AZFc и азооспермией при биопсии яичка довольно часто могут быть получены и успешно использованы в циклах ИКСИ тестикулярные сперматозоиды [7, 8].

Также не менее важным фактом является возможность передачи потомству мужского пола делеций AZF. Помимо этого, частичные делеции субрегиона AZFc располагают к появлению полных делеций в последующих поколениях. Мальчики, рожденные после применения ИКСИ у отцов с микроделециями в хромосоме-Y, подлежат диспансерному наблюдению для оценки их фертильного статуса [2].

Для определения микроделеций в регионах используются STS-маркеры (Sequence-Tagged-Sites), которые маркируют соответствующие участки локуса AZF. Как следует из рекомендации Европейского общества андрологов, анализа только одного не полиморфного STS в каждом из субрегионов AZF достаточно для определения существования делеций в AZFa, AZFb или же AZFc. Однако исследование двух маркеров усиливает диагностическую точность. На основании опыта многих лабораторий рекомендуется следующий набор из шести STS-праймеров, делеции которых жестко ассоциированы с нарушением сперматогенеза:

— для AZFa: sY84, sY86;

— для AZFb: sY127, sY134;

— для AZFc: sY254, sY255 [9].

При всем этом использование такого ограниченного количества специфичных маркеров не может в полной мере отразить всю диагностическую картину и до ¼ случаев мужского бесплодия остаются идиопатическими [10]. Как видно на рисунке, более целесообразно исследование целых блоков, а не только единичных маркеров.

Именно поэтому в настоящее время обсуждается возможность расширения числа изучаемых маркеров локуса AZF для уточнения причины бесплодия.

Цель настоящего исследования — определение клинической значимости расширенного спектра STS-маркеров.

Материал и методы

Всего были комплексно обследованы 218 мужчин из бесплодных супружеских пар. По результатам кариотипирования из исследования были исключены 13 мужчин в связи с выявленными у них нарушениями кариотипа, такими как синдром Кляйнфельтера, де ля Шапеля (синдром ХХ-male), и различными деривациями и инверсиями хромосом.

Остальные 205 человек были разделены на две группы в зависимости от состояния сперматогенеза: 143 пациента с азооспермией и тяжелой формой олигозооспермии (концентрация сперматозоидов менее 5 млн в 1 мл) составили основную группу и 62 пациента с нормозооспермией — контрольную. Анализ эякулята проводился двукратно, согласно рекомендациям ВОЗ 2010 г. [11].

Медиана возрастного состава в основной группе — 32 года (интерквартильный интервал 21—52 года), в группе контроля — 35 лет (25—52 года).

Кроме того, по результатам физикального обследования и данным анамнеза в основной группе были выявлены 66 человек с гипогонадизмом, 36 — с варикоцеле, 19 — с обструкцией семявыносящего протока, 14 — с крипторхизмом в анамнезе. В контрольной группе 10 — c гипогонадизмом, 6 — с варикоцеле, 2 — с крипторхизмом в анамнезе.

Всем мужчинам, участвующим в исследовании, был проведен молекулярно-генетический анализ для выявления делеций AZF по наличию следующих STS-маркеров: AZFa: sY86, sY84, sY615; AZFb: sY127, sY134, sY142; AZFc: sY242, sY254, sY1291, sY255, sY1192, sY1197, sY1206, sY1125 методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) в реальном времени коммерческим набором ООО «НПО ДНК-Технология» (Россия).

Для выявления делеций в локусе AZF хромосомы Y всем мужчинам проводился молекулярно-генетический анализ.

Забор крови у обследуемых осуществлялся в стандартные пробирки с ЭДТА. ДНК для проведения полимеразной цепной реакции (ПЦР) выделяли из лейкоцитов периферической крови, используя коммерческие наборы ДНК-Технология, Проба-Рапид-Генетика. Полученные образцы ДНК использовали для типирования сразу либо хранили при –20 °С. ПЦР проводили с помощью наборов производства ДНК-Технология.

Амплификацию и детекцию продуктов амплификации проводили с помощью детектирующего амплификатора ДТ-96 производства НПФ ДНК-Технология. Температурный режим амплификаци: денатурация при 94 °C в течение 5 с, отжиг, элонгация и детекция флуоресценции при 64 °C — 15 с (50 циклов). Типирование проводилось по 14 STS-маркерам: sY84, sY86, sY615, sY127, sY134, sY254, sY255, sY1192, sY1291, sY242, sY1125, sY1197, sY1206 и sY142.

Использовали 8 мультиплексных систем для ПЦР со следующими парами праймеров и зондов: система 1 (sY134, sY242), система 2 (sY142, sY255), система 3 (sY615, sY254), система 4 (sY1125, sY84), система 5 (sY1197, sY86), система 6 (sY1206, sY127), система 7 (sY1291). В систему 8 были включены праймеры и зонды для амплификации ДНК гена половой принадлежности (SRY), а также зонды для амплификации ДНК гена рецептора гормона роста в качестве дополнительного контроля амплификации. Для внешнего контроля были использованы образцы крови женщин.

При отсутствии амплификации какого-либо из фрагментов ПЦР проводили еще раз и при повторении результата определяли у пациента делецию. Положительный (образец ДНК мужчины-донора) и отрицательные (образец ДНК женщины, отсутствие ДНК) контроли ставили в каждом ПЦР-эксперименте.

В пользу применения расширенного набора маркеров свидетельствует тот факт, что у 4 мужчин с азооспермией из основной группы были выявлены всего 2 маркера из классической панели, что требует дальнейших диагностических исследований. Наряду с этим в расширенной панели у них наблюдалось до 6 делеций. Так, в классическом варианте были выявлены делеции субрегиона AZFb sY127 и sY134, но отсутствовали остальные маркеры из классической панели. Использование панели из 14 маркеров показало, что имеется также и частичная делеция субрегиона AZFс. При этом сопутствующие патологии, которые могли бы повлиять на фертильность, у мужчин отсутствовали.

Заключение

Делеции sY1197 совместно с делецией sY1192, без включения «классических» маркеров региона AZFc (sY254, sY255) встретились у 2 мужчин с азооспермией. В группе мужчин с сохраненным сперматогенезом подобных делеций не выявлено. Делеции маркеров sY1192 и sY1291 встречались как у мужчин с нарушением сперматогенеза, так и в группе с нормозооспермией. Причем делеция sY1192 изолированно встречается в обеих группах практически с одинаковой частотой — 11 и 8,06% соответственно. Исходя из полученных результатов исследования [12, 13], диагностическая значимость изолированной делеции маркера sY1192 не представляет интереса, что подтверждает результаты прошлых исследований. Делеция маркера sY1291, так называемая «gr/gr»-делеция, встречалась в 3 раза чаще в группе исследования, однако разница была статистически незначимой, что может быть следствием малого числа наблюдений. Требуются дополнительные исследования по ассоциации «неклассических» AZF-делеций с тяжестью нарушений сперматогенеза.

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

Источник

Анализ микроделеций AZF локуса Y хромосомы у мужчин c бесплодием

В современном мире бесплодие представляет собой важную медико-социальную проблему, затрагивающую демографические основы общества. Бесплодием страдают около 15% супружеских пар, при этом, неуклонно растет доля мужского фактора и по данным Европейской ассоциации урологов она в настоящее время составляет около 50% [1]. Приблизительно у 5% мужчин репродуктивного возраста имеются различные количественные и качественные изменения спермы. Около 1/3 случаев мужского бесплодия относят к так называемому идиопатическому типу бесплодия, большинство случаев которого может быть обусловлено генетическими факторами, такими как различные нарушения хромосом или мутации в ответственных за сперматогенез генах [2,3].

Результаты многочисленных исследований, посвященных изучению роли генетических факторов в этиологии бесплодия, убедительно доказывают ведущее место данных факторов в структуре нарушений репродуктивной функции как у мужчин, так и у женщин [4,5]. Так, генетические факторы обуславливают, по крайней мере, 30-50% всех случаев тяжелых форм бесплодия у мужчин. Помимо аномалий кариотипа наиболее частой генетической причиной бесплодия у мужчин являются делеции Y-хромосомы, захватывающие локус AZF. Распространенность данной мутации среди мужчин с выраженными отклонениями в показателях спермограммы широко варьирует в различных популяциях и составляет в среднем 7,6% [6,7].

Делеции AZF-локуса связаны с различной степенью нарушения сперматогенеза от умеренного снижения его активности (гипосперматогенез) или блока сперматогенеза до практически полного отсутствия половых клеток в семенных канальцах – Сертоли клеточный синдром (СКС) [4-6, 8-12].

Азооспермия и олигозооспермия тяжелой степени являются одними из наиболее тяжелых форм нарушения сперматогенеза и составляют 10-20% и 15-20%, соответственно, от всех нарушений репродуктивной функции у мужчин при измененных показателях спермограммы. С помощью имеющихся в настоящее время методов цитогенетической и молекулярно-генетической диагностики макро- и микроделеции Y-хромосомы, захватывающие локус AZF, удается обнаружить у 10-15% мужчин с азооспермией и у 5-10% мужчин с олигозооспермией тяжелой степени [5-8,11-15].

Впервые роль делеций локуса Yq11 в этиологии нарушения сперматогенеза и бесплодия у мужчин была показана в 1976 г. L. Tiepolo и O. Zuffardi [16]. Дальнейшие цитогенетические и молекулярно-генетические исследования позволили с помощью STS-технологии (sequencetagged sites) построить детальную карту Y-хромосомы, включающую 43 делеционных интервала [17]. Было подтверждено наличие в дистальной части длинного плеча Yхромосомы локуса AZF, делеции которого ответственны за нарушение сперматогенеза. В 1996 г. P.H. Vogt и соавт. на основе полученных данных о локализации и размере делеций, выявленных у 26 мужчин, предложили выделить в локусе Yq11.21-q11.23 три неперекрывающихся субрегиона: AZFa, AZFb и AZFc [18].

Целью нашего исследования явилось уточнение структуры и определение роли генетических нарушений при бесплодии.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

За период с 2017 по 2018 гг. было обследовано 63 пациента с первичным бесплодием. На основании результатов спермиологического исследования мужчин с бесплодием разделили на 2 группы: группу с азооспермией и контрольную группу (табл. 1). В группу с азооспермией были включены 63 пациента, контрольную группу составили 30 здоровых (фертильных) мужчин.

Обследование, проведенное пациентам, включало общеклиническое, общее и специальное андрологическое исследование, сперматологическое (стандартное спермиологическое исследование, в некоторых случаях – гистологическое исследование биоптата яичка), молекулярно-генетическое исследование (анализ микроделеций Y-хромосомы).

Спермиологический анализ эякулята выполняли по стандартной методике, рекомендованной ВОЗ [19]. Гистологическое исследование биоптата яичка проводилось путем цитогистологического анализа [9].

Полимеразную цепную реакцию (ПЦР) выполняли на программируемом термоциклере МС2 производства фирмы «ДНК-технология» (Россия) с использованием Taq-полимераз.

Анализ микроделеций локуса AZF был проведен в соответствии с руководством по молекулярной диагностике микроделеций Y-хромосомы [12]. Для обнаружения делеций применяли мультиплексную амплификацию (МПА), предложенную в данном руководстве в собственной модификации. На первом этапе анализа выполняли детектирование делеций в трех субрегионах AZF.

РЕЗУЛЬТАТЫ

Среди 63 обследованных мужчин кыргызов с бесплодием делеции локуса AZF были обнаружены у 7 (11,1%) пациентов (табл. 1). Делеции Y-хромосомы были выявлены только у пациентов с азооспермией. Ни одной Y-делеции не было обнаружено у фертильных мужчин контрольной группы. Чаще всего делеции располагались в AZFc-субрегионе (57,1% делеций Y-хромосомы) (табл. 2). Микроделеции субрегиона AZFb были выявлены только у двух пациентов (28,6 % случаев от всех обнаруженных делеций локуса AZF) и у одного пациента выявлена микроделеция AZFa+b+c – субрегиона (14,3% случаев).

Таблица 1. Частота делеций локуса AZF в обследованных группах мужчин

Таблица 2. Количество обнаруженных микроделеций AZF локуса длинного плеча Y-хромосомы

Спермиологическая и гистологическая картина, обнаруженная нами у мужчин с делециями локуса AZF, выявляла различную степень нарушений сперматогенеза. У обоих пациентов с микроделециями AZFbсубрегиона отмечали азооспермию. Гистологическое исследование биоптата яичка, проведенное у одного из них, позволило выявить синдром клеток Сертоли. По результатам молекулярного анализа у этих пациентов область делеции захватывала маркер sY1197 субрегиона AZFb. У мужчин с делециями субрегиона AZFc сперматозоиды отсутствовали (азооспермия). При анализе гистопрепаратов биоптата яичка, выполненного у двух из этих пациентов, было установлено, что у одного из них половые клетки отсутствовали в большинстве семенных канальцев.

ОБСУЖДЕНИЕ

Частота обнаружения микроделеций Y-хромосомы среди мужчин с бесплодием значительно варьирует в различных исследованиях (от 1% до 35%) [7,8,10,20]. Широкий разброс частот выявляемости делеций обусловлен влиянием ряда факторов, среди которых наибольшее значение имеют критерии отбора пациентов для проведения микроделеционного анализа. В среднем выявлено наличие делеций локуса AZF у 7,5% мужчин с бесплодием, при этом наибольшая частота делеций отмечена среди мужчин с идиопатической азооспермией (18%) или тяжелой олигозооспермией неясного генеза (14,3%) [9]. Количество делеций, выявленных по результатам нашего исследования, в общем аналогично частоте встречаемости делеций отдельных субрегионов или захватывающих несколько регионов, а также аналогично средней частоте встречаемости микроделеций в азиатских популяциях [20]. При этом соотношение между различными типами выявленных нами делеций в целом отражает структуру делеционных нарушений в локусе AZF у мужчин с бесплодием.

При делециях, захватывающих субрегионы AZFb и AZFc, у мужчин выявляются азооспермия и СКС. Определение зависимости степени нарушения сперматогенеза от размера и локализации делеций может иметь прогностическое значение для возможного получения сперматозоидов, пригодных для проведения ICSI (Intra Cytoplasmic Sperm Injection) – инъекцией сперматозоида в цитоплазму ооцита [5,8,11]. Наличие делеций, захватывающих субрегионы AZFa или AZFb, указывает на невозможность получения зрелых половых клеток, а у пациентов с делециями AZFc при биопсии яичка примерно в 50-70 % случаев удается получить зрелые сперматозоиды [5,11].

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Результаты многочисленных исследований микроделеций Y-хромосомы у мужчин с бесплодием, а также оценка роли генов локуса AZF в дифференцировке и развитии мужских половых клеток убедительно свидетельствуют о высокой значимости генов Y-хромосомы в контроле сперматогенеза у человека. У специалистов в области генетики, андрологии, репродуктивной медицины произошло осознание того, что азооспермия является одной из наиболее распространенных причин бесплодия у мужчин, и исследование микроделеций Y-хромосомы широко вошло в практику. Молекулярно-генетический анализ Y-хромосомы на наличие классических микроделеций должен быть рекомендован всем мужчинам с азооспермией или олигозооспермией тяжелой степени.

Исследование микроделеций AZF локуса Y-хромосомы у мужчин с тяжелой формой олигозооспермии и азооспермии позволяет установить генетическую причину нарушения сперматогенеза и является важным диагностическим и прогностическим критерием, определяющим рациональную тактику лечения, выбор метода преодоления бесплодия, а также прогнозировать вероятность получения сперматозоидов для проведения экстракорпорального оплодотворения, в частности интрацитоплазматической инъекции сперматозоида в ооцит.

ЛИТЕРАТУРА

Статья опубликована в журнале»Экспериментальная и клиническая урология» №2 2018, стр.90-93

Источник