наличие фосфатазы можно определить по реакции

Методы определения пастеризации молока

Эффективность пастеризации молока и молочных продуктов контролируют химическим методом по ГОСТ 3623. Химические методы основаны на определении присутствия пероксидазы и фосфатазы в сыром молоке и приготовленных из него продуктах и отсутствия этих ферментов в пастеризованном молоке и продуктах, выработанных из него.

Фосфатаза – фермент молока, относящийся к гидролазам, расщепляющий эфиры фосфорной кислоты, инактивирующийся при температуре пастеризации не ниже 63°С с выдержкой 30 мин.

Пероксидаза – фермент молока, относящийся к оксиредуктазам и инактивирующийся при температуре пастеризации не ниже 80°С с выдержкой 20–30 с.

1. Определение фосфатазы

1.1. По реакции с 4-аминоантипирином

Сущность метода. Метод основан на гидролизе динатриевой соли фенилфосфорной кислоты ферментом фосфатазой, содержащейся в молоке и молочных продуктах. Выделившийся при гидролизе свободный фенол в присутствии окислителя дает розовое окрашивание с 4-аминоантипирином.

Оборудование, материалы и реактивы. Весы неавтоматического действия; термометр лабораторный жидкостный диапазоном измерения температур от 0 до 100°С; часы электронномеханические; баня водяная термостатируемая; колбы мерные вместимостью 100 мл и 1 л; пипетки на 2 и 5 мл, цилиндры на 100 мл, колба коническая на 250 мл; воронка на 80 мл; пробирки и штатив для пробирок; бумага фильтровальная; бумага индикаторная универсальная; 4-аминоантипирин; аммиак водный; аммоний хлористый; динатриевая соль фенилфосфорной кислоты двухводная; медь (II) сернокислая 5-водная; натрия гидроокись, раствор молярной концентрации 1,0 моль/л; уголь активированный; цинк сернокислый 7-водный; эфир этиловый; вода дистиллированная. (Приготовление основного буферного раствора, субстрата, рабочего раствора субстрата, осадителя системы цинк — медь, гидроокиси натрия молярной концентрации с (NaOH) = 1,0 моль/л).

Техника определения

В пробирку помещают 3 мл продукта, добавляют 2 мл рабочего раствора субстрата, аккуратно перемешивают и нагревают в водяной бане при температуре 42±2°С в течение 30 мин. Затем в пробирку добавляют 5 мл осадителя системы цинк – медь, тщательно перемешивают содержимое пробирки и снова погружают в водяную баню температурой 42±2°С на 10 мин. Пробирку вынимают из водяной бани и проводят визуальное сравнение содержимого пробирки испытуемого продукта с контрольным опытом.

Контрольный опыт. Контрольным опытом для всех продуктов является аналогичная реакция с кипяченым молоком. Если контрольный опыт с кипяченым молоком дает слабо-розовое окрашивание, то динатриевая соль фенилфосфорной кислоты подлежит дополнительной очистке.

При отсутствии фермента фосфатазы в исследуемом продукте окраска содержимого пробирки (раствора, отделившегося от осажденного белка) будет бесцветной, т.е. аналогичной содержимому пробирок в контрольном опыте. Следовательно, молоко и молочные продукты подвергались пастеризации при температуре не ниже 63°С.

При наличии фосфатазы в исследуемом продукте содержимое пробирок (раствора) будет иметь оттенок от розового до темно-красного. Следовательно, молоко и молочные продукты не подвергались пастеризации или подвергались пастеризации при температуре ниже 63°С, или были смешаны с непастеризованным молочным продуктом.

При оценке реакции учитывается только цвет, но не прозрачность раствора. Чувствительность метода позволяет обнаружить добавление непастеризованных молочных продуктов к пастеризованным в следующих количествах: 0,3% – в молоке, сливках, кисломолочных продуктах (жидких); 0,5% – в твороге и сметане; 1% – в кисломолочных продуктах с немолочными компонентами и сыворотке.

1.2. По реакции с фенолфталеинфосфатом натрия

Сущность метода. Метод основан на гидролизе фенолфталеинфосфата натрия ферментом фосфатазой, содержащейся в молоке и молочных продуктах. Освобождающийся при гидролизе фенолфталеин в щелочной среде дает розовое окрашивание.

Оборудование, материалы и реактивы. Весы лабораторные аналитические; весы лабораторные технические; пробирки; пипетки вместимостью 2 мл; пипетки вместимостью 5 и 10 мл; капельницы из темного стекла; колбы мерные вместимостью 250 и 500 мл; колбы конические вместимостью 250 мл; баня водяная; вода дистиллированная; аммиак водный, химически чистый, раствор молярной концентрации 1,0 моль/л; аммоний хлористый, химически чистый раствор молярной концентрации 1,0 моль/л; фенолфталеинфосфат натрия, раствор массовой долей 0,1%; вода дистиллированная.

Техника определения

В пробирку отмеривают 2 мл исследуемого молока и 1 мл раствора фенолфталеинфосфата натрия и тщательно перемешивают. Пробирку с содержимым помещают на водяную баню при 42±2°C и определяют окраску содержимого пробирки через 10 мин. и 1 ч. При наличии фосфатазы содержимое пробирки приобретает окраску от светло-розовой до ярко-розовой. Отсутствие окрашивания – признак надежной пастеризации молока. Это значит, что пастеризация продолжалась не менее 30 мин. при температуре не ниже 63°C.

Сырое или пастеризованное молоко с нарушением установленных температурных режимов дает окрашивание от светлого до ярко-розового – фосфатаза остается в активном состоянии. Аналогичный результат будет и в том случае, если пастеризованное молоко содержит примесь сырого молока.

2. Определение пероксидазы

2.1. По реакции с солянокислым парафенилендиамином

Сущность метода. Метод основан на разложении перекиси водорода ферментом пероксидазы, содержащейся в молоке и молочных продуктах. Освобождающийся при разложении перекиси водорода активный кислород окисляется парафенилендиамином, образуя соединение синего цвета.

Оборудование, материалы и реактивы. Весы неавтоматического действия; часы электронно-механические; термометр лабораторный жидкостный диапазоном измерения температур от 0 до 100°С; баня водяная термостатируемая; плитка электрическая; бюретки; колбы мерные на 100 мл, 500 мл, 1 л; пипетки; капельница из темного стекла; колба коническая; пробирки, стаканы; воронка; бумага фильтровальная; штатив для пробирок; палочки стеклянные оплавленные; водорода пероксид (перекись), раствор массовой долей 0,5 %; калий марганцовокислый, молярной концентрации 0,1 моль/л; кислота лимонная, кислота серная; натрий фосфорнокислый двузамещенный; парафенилендиамин солянокислый с содержанием основного вещества не менее 99,5%, раствор массовой долей 2%; вода дистиллированная.

Подготовка проб. Кисломолочные продукты с немолочными компонентами (например, с плодово-ягодными наполнителями) фильтруют через бумажный фильтр. Продукты с отделяемыми пищевкусовыми компонентами и декорированные (орехи, печенье, вафли в виде декора, глазурь, начинки в виде стержня и другие отделяемые компоненты) максимально полно освобождают от наполнителей, глазури и декора. Для получения 2–3 мл плазмы масла 50,0 г сливочного масла или масляной пасты расплавляют при температуре 50±2°С и охлаждают до температуры 15±2°С. Затем застывший слой жира удаляют, плазму фильтруют через бумажный фильтр.

Техника определения

Проводят два параллельных измерения. В пробирку помещают 5 мл молока, добавляют 2,5 мл буферной смеси и тщательно перемешивают стеклянной палочкой. Пробирки с содержимым помещают в водяную баню и термостатируют при температуре 35±2°С в течение 5±1 мин. Затем в пробирки добавляют 6 капель раствора перекиси водорода массовой долей 0,5% и 3 капли раствора парафенилендиамина солянокислого массовой долей 2%, перемешивая вращательными движениями пробирки после добавления каждого реактива. Пробирки помещают в водяную баню температурой 35±2°С и наблюдают изменение окраски содержимого пробирки.

При отсутствии фермента пероксидазы в молоке и молочных продуктах цвет содержимого пробирки не изменяется. Следовательно, молоко и молочные продукты подвергались пастеризации при температуре не ниже 80°С. При наличии пероксидазы в молоке, сливках, сливочном масле содержимое пробирок приобретает темно-синее окрашивание. При наличии пероксидазы в кисломолочных продуктах и кисло-сливочном масле содержимое пробирок приобретает серо-фиолетовый цвет, постепенно переходящий в темно-синее окрашивание. Следовательно, молоко и молочные продукты не подвергались пастеризации или подвергались пастеризации при температуре ниже 80°С, или были смешаны с непастеризованными продуктами. Чувствительность метода позволяет обнаружить добавление не менее 5% непастеризованных молочных продуктов к пастеризованным.

2.2. По реакции с йодистокалиевым крахмалом

Сущность метода. Метод основан на разложении перекиси водорода ферментом пероксидазой, содержащейся в молоке и молочных продуктах. Освобождающийся при разложении перекиси водорода активный кислород окисляет йодистый калий, освобождая йод, образующий с крахмалом соединение синего цвета.

Оборудование, материалы и реактивы. Водорода пероксид (перекись), раствор массовой долей 0,5%; крахмал растворимый, калий йодистый; вода дистиллированная.

Техника определения

Проводят два параллельных измерения. В пробирку помещают 5 мл молока. Добавляют 5 капель раствора йодистокалиевого крахмала и 5 капель раствора перекиси водорода массовой долей 0,5%, перемешивая вращательными движениями содержимое пробирки после добавления каждого реактива. Затем наблюдают изменение окраски содержимого пробирки.

При отсутствии фермента пероксидазы в молоке и молочных продуктах цвет содержимого пробирки не изменится. Следовательно, молоко и молочные продукты подвергались пастеризации при температуре не ниже 80°С. При наличии пероксидазы в молоке, сливках, сливочном масле содержимое пробирок приобретает темно-синее окрашивание. При наличии пероксидазы в кисломолочных продуктах и кисло-сливочном масле содержимое пробирок не более чем через 2 мин. приобретает серовато-синюю окраску, постепенно переходящую в темно-синюю. Следовательно, молоко и молочные продукты не подвергались пастеризации или подвергались пастеризации при температуре ниже 80°С, или были смешаны с непастеризованными молочными продуктами. Появление окраски в пробирках более чем через 2 мин. после добавления йодистокалиевого крахмала и перекиси водорода не указывает на отсутствие пастеризации, так как может вызываться разложением реактивов.

Чувствительность метода позволяет обнаружить добавление не менее 5% непастеризованных молочных продуктов к пастеризованным, а для кисломолочных продуктов с немолочными компонентами – 0,5%.

Источник

Щелочная фосфатаза в крови – норма и причины отклонения от нормы

» data-image-caption=»» data-medium-file=»https://i2.wp.com/medcentr-diana-spb.ru/wp-content/uploads/2021/10/Щелочная-фосфатаза-в-крови-–-норма-и-причины-отклонения-от-нормы.jpg?fit=450%2C300&ssl=1″ data-large-file=»https://i2.wp.com/medcentr-diana-spb.ru/wp-content/uploads/2021/10/Щелочная-фосфатаза-в-крови-–-норма-и-причины-отклонения-от-нормы.jpg?fit=825%2C550&ssl=1″ />

Щелочная фосфатаза – важный фермент в организме человека.

Если у пациента есть признаки заболевания печени или проблемы с костями, врач может назначить тест на щелочную фосфатазу (ЩФ), чтобы измерить количество фермента в крови и диагностировать проблему.

Что показывает щелочная фосфатаза?

В организме человека происходят многие биохимические процессы, в том числе реакция дефосфорилирования. В этом случае фосфорная кислота отделяется от органических эфирных соединений, участвуя в кальций-фосфорном обмене. Этот процесс происходит в присутствии фермента щелочная фосфатаза.

Щелочная фосфатаза – это фермент, обнаруженный во многих тканях организма. Но в основном она сконцентрирована в клетках печени, костях, плаценте. Основной объем приходится на слизистую кишечника.

Щелочная фосфатаза представлена ​​в организме 11 изоферментами. Для определения причины повышенной щелочной фосфатазы необходимо также определить ее изоферменты, специфичные для определенных тканей:

Щелочная фосфатаза вырабатывается верхним слоем слизистой оболочки кишечника, но только вторично участвует в пищеварительных процессах. Основная функция щелочной фосфатазы – дефосфорилирование, то есть отделение фосфорной кислоты от фосфорсодержащих соединений. Этот фермент также способствует транспортировке фосфора по организму.

Фермент называют «щелочным», потому что он проявляет наибольшую активность в щелочной среде с pH в диапазоне от 8,6 до 10,1.

Соблюдение содержания щелочной фосфатазы отражает метаболическую эффективность фосфора и кальция в организме.

Щелочная фосфатаза у детей – норма, причины отклонения от нормы

Контрольные значения для теста на щелочную фосфатазу меняются в зависимости от возраста из-за роста.

Нормальный уровень щелочной фосфатазы в плазме зависит от возраста и пола. Норма для детей и подростков:

Уровень этого фермента в сыворотке крови может незначительно отличаться в зависимости от используемых методов тестирования и реагентов.

В педиатрической практике исследование активности щелочной фосфатазы играет важную роль в диагностике заболеваний печени, что дополняется снижением оттока желчи в двенадцатиперстной кишке. Кроме того, уровень щелочной фосфатазы в крови ребенка часто повышен. Высокий уровень фосфатазы нарушает отток желчи из-за камней в желчных протоках или опухолей желчных протоков.

Ребенку с повышенной щелочной фосфатазой врач может поставить следующие диагнозы:

Большое значение у детей имеет показатель щелочной фосфатазы в ранней диагностике рахита. В этом случае активность фермента увеличивается задолго до появления клинических симптомов заболевания.

Иногда происходит физиологическое, то есть естественное, повышение уровня щелочной фосфатазы в сыворотке крови: у недоношенных детей или подростков в период полового созревания и интенсивного роста костей.

Лекарственные препараты с побочными гепатотоксическими эффектами могут также повышать уровень фермента щелочной фосфатазы у ребенка. К таким препаратам относятся парацетамол, пенициллины, сульфаниламиды, эритромицин и многие другие. Повышенный метаболизм в костной ткани во время заживления переломов костей часто увеличивает уровень этого фермента.

Снижение уровня фермента щелочной фосфатазы не имеет клинического значения. Снижение уровня ферментов может происходить при различных нарушениях роста костей, дефиците цинка, магния, витаминов C и B12 в пище, анемии и гипотиреозе, а также в редких случаях врожденной гипофосфатазии.

Как уменьшить щелочную фосфатазу?

Чтобы уровень щелочной фосфатазы у ребенка был нормальным, необходимо вылечить основное заболевание, а не просто довести его до нормы.

Активность щелочной фосфатазы у детей всегда выше, чем у взрослых. В некоторых случаях повышенная активность фосфатазы – единственный признак злокачественного новообразования печени. Именно поэтому так важно провести все необходимые клинические испытания и вовремя начать лечение ребенка, чтобы оно привело к скорейшему выздоровлению.

Щелочная фосфатаза у взрослых – норма, причины отклонения от нормы

Тест на определение уровня фермента в крови проводится в следующих случаях:

После шестнадцати лет количество щелочной фосфатазы начинает снижаться. Но диапазон его нормальной концентрации все же достаточно широк.

При наступлении зрелого и солидного возраста уровень ферментов снова повышается и должен быть (ед / л):

У взрослых значения количества щелочной фосфатазы незначительно различаются в зависимости от пола, для мужчин норма на 20-25 ед / л выше, чем для женщин того же возраста:

Аномальная щелочная фосфатаза – причины

Причины повышения уровня щелочной фосфатазы можно сгруппировать следующим образом:

III. Прочие патологии:

Превышение нормы фермента не всегда указывает на тип заболевания. Может быть, человек здоров и рост щелочной фосфатазы обусловлен физиологическими свойствами. Поэтому необходимо провести дополнительные анализы, чтобы определить точные причины.

Уровень щелочной фосфатазы ниже нормы

Понижение содержания фермента может сигнализировать о появлении или наличии в организме опасных заболеваний.

Причины снижения содержания ферментов:

В каких случаях проводится анализ крови на щелочную фосфатазу?

В клинической практике уровни щелочной фосфатазы приобретают важное диагностическое значение только в сочетании с другими лабораторными и инструментальными исследованиями. Поэтому пациентам обычно сдают биохимический анализ крови, который включает щелочную фосфатазу.

Это исследование показано всем амбулаторным и стационарным пациентам с нарушениями функции печени, почек, пищеварения и эндокринной системы. В настоящее время в большинстве случаев они ограничиваются определением общего уровня щелочной фосфатазы, поскольку фракционный анализ, хотя и более информативный, очень дорог и проводится только в специализированных лабораториях.

Как проводится анализ на щелочную фосфатазу?

Чтобы получить правильный результат теста, нужно соблюдать следующие правила:

Обычно результаты анализов готовы через 1 – 2 дня.

Особенности определения щелочной фосфатазы

Для анализа используется сыворотка крови. В большинстве случаев берут верхний слой, образовавшийся в трубке сепаратора. Активность этого фермента может незначительно отличаться при хранении образцов крови при комнатной температуре. Гемолиз in vitro не влияет на результаты анализа.

Что делать при аномальном уровне щелочной фосфатазы?

При лечении следует указывать этиологическое направление. При заболеваниях печени или желчевыводящих путей стоит обратиться к гастроэнтерологу. Наличие холестаза, панкреатита, алкогольного гепатита или цирроза печени требует соответствующей медицинской коррекции, размер которой определяет только врач. Самолечение в этом случае может обострить основное заболевание.

Изменения уровней ферментов, в том числе щелочной фосфатазы, могут наблюдаться при сердечной недостаточности, раке и серьезных проблемах с почками, а также при диабете, поэтому следует проконсультироваться с кардиологом, нефрологом или эндокринологом. Врач определяет лечебную тактику в зависимости от клинической картины.

За счет устранения этиологических факторов нормализуется активность щелочной фосфатазы. При назначении терапии следует учитывать, что, например, физиологическое повышение этого показателя возможно при переломах, активном росте скелета и вынашивании плода. Это не требует медицинского вмешательства. Интерпретацию результатов лабораторного исследования следует проводить комплексно с учетом других биохимических показателей и жалоб пациентов.

Источник

3.12. Методы определения фосфатазы

Фосфатаза инактивируется при температуре пастеризации не ниже 63 °С с выдержкой 30 мин.

Определение фосфатазы по реакции с 4-аминоантипирином (арбитражный метод)

Метод основан на гидролизе динатриевой соли фенилфосфорной кис­лоты ферментом фосфатазой, содержащейся в молоке и молочных продуктах. Выделившийся при гидролизе свободный фенол в присут­ствии окислителя дает розовое окрашивание с 4-аминоантипирином.

Аппаратура, материалы и реактивы:

Подготовка к анализу. Молоко пастеризованное, сливки для прове­дения анализа дополнительной подготовки не требуют.

Приготовление основного буферного раствора (рН 10 ± 0,2). 40 г хло­ристого аммония (NН₄С1), взвешенного с погрешностью не более 0,01 г, растворяют в 100–200 см 3 дистиллированной воды, добавляют 348 см 3 25%-ного водного аммиака (NH₄ОН) и доводят до 1 дм 3 дис­тиллированной водой.

Приготовление субстрата. Приготовление раствора А: 1,25 г дина­триевой соли фенилфосфорной кислоты (С₆Н₅О₄Р Na ₂ ), взвешивают с погрешностью на более 0,0002 г, растворяют в 100 см 3 основного бу­ферного раствора.

Приготовление раствора Б: 0,8 г 4-аминоантипирина (С₁₁Н₁₁О N ₂ N Н₂), взвешенного с погрешностью не более 0,0002 г, растворяют в 900 см 3 дистиллированной воды.

Растворы А и Б должны быть бесцветными и храниться в склянках из темного стекла в холодильнике. Срок хранения не более 1 мес. По­желтевшие растворы для работы непригодны.

Рабочий раствор субстрата готовят непосредственно перед опреде­лением фосфатазы смешиванием растворов А и Б (1:9). Рабочий рас­твор пригоден для работы в течение 8 ч при хранении его в склянке из темного стекла.

При необходимости динатриевую соль фенилфосфорной кислоты очищают от свободного фенола промыванием этиловым эфиром до полного удаления фенола. Сушить реактив при комнатной темпера­туре под тягой.

Приготовление осадителя системы цинк-медь. 30 г сульфата цин­ка (ZnSО₄ • 7Н₂О) и 6 г сульфата меди ( Cu S O ₄ • 5Н₂ O ), взвешенных с погрешностью не более 0,01 г, растворяют в 1 дм 3 дистиллированной воды.

Проведение анализа. К 3 см 3 молока, сливок добавляют 2 см 3 рабо­чего раствора субстрата. Затем перемешивают содержимое пробирки и ставят в водяную баню, нагретую до 40–45 °С на 30 мин. В пробирку, вынутую из водяной бани, добавляют 5 см 3 осадителя системы цинк-медь, тщательно перемешивают содержимое пробирки и снова ставят в водяную баню с температурой 40-45 °С на 10 мин. Вынув пробирку из бани, производят визуальное сравнение содержимого пробирки ис­пытуемого продукта с контрольным опытом.

Контрольным опытом для всех продуктов является аналогичная ре­акция с кипяченым молоком. Если контрольный опыт с кипяченым молоком дает слабо-розовое окрашивание – динатрийфенилфосфат подлежит дополнительной очистке.

Оценка результатов. При отсутствии фермента фосфатазы в молоке окраска содержимого пробирки (раствора, отделившегося от осажден­ного белка) бесцветная, т. е. аналогичная содержимому пробирок кон­трольного опыта. Следовательно, молоко подвергалось пастеризации при температуре не ниже 63 °С.

При наличии фосфатазы в молоке содержимое пробирок (раствор) имеет окрашивание от розового до темно-красного цвета. Следова­тельно, молоко не подвергалось пастеризации или подвергалось па­стеризации при температуре ниже 63 °С, или было смешано с непасте­ризованным молоком.

При оценке реакции учитывается только цвет, но не прозрачность раствора.

Чувствительность метода позволяет обнаружить добавление непа­стеризованного молока к пастеризованному: 0,3 % в молоке, сливках.

Определение фосфатазы по реакции с фенолфталеинфосфатом натрия

Метод основан на гидролизе фенолфталеинфосфата натрия фермен­том фосфатазой, содержащейся в молоке. Освобождающийся при гид­ролизе фенолфталеин в щелочной среде дает розовое окрашивание.

Аппаратура, материалы и реактивы:

Подготовка к анализу. Приготовление аммиачной буферной смеси. 80 см 3 1 н. раствора аммиака смешивают с 20 см 3 1 н. раствора хлори­стого аммония (рН 9,8).

Приготовление 0,1%-ного раствора фенолфталеинфосфата натрия. 0, 1 г порошкообразного фенолфталеинфосфата натрия, взвешенного с погрешностью не более 0,0002 г, растворяют в мерной колбе вмести­мостью 100 см 3 с небольшим количеством буферной смеси, затем до­ливают буферную смесь до метки и перемешивают.

Проведение анализа. В пробирку отмеривают анализируемый про­дукт, дистиллированную воду и реактив. Количество анализируемого продукта, дистиллированной воды и реактива должно соответствовать указанному в табл. 33.

Таблица 33

После добавления дистиллированной воды и реактива содержимое пробирки закрывают пробкой и взбалтывают.

Затем пробирку помещают в водяную баню с температурой воды от 40 до 45 °С и определяют окраску содержимого пробирки через 10 мин и через 1 ч.

Оценка результатов. При отсутствии фермента фосфатазы в молоке окраска содержимого пробирки не изменяется. Следовательно, моло­ко подвергалось пастеризации при температуре не ниже 63 °С. При на­личии фосфатазы в молоке содержимое пробирки приобретает окраску от светло-розовой до ярко-розовой. Следовательно, молоко не подвер­галось пастеризации или подвергалось пастеризации при температуре ниже 63 °С, или было смешано с непастеризованным молоком.

Чувствительность метода позволяет обнаружить добавление не ме­нее 2 % непастеризованного молока к пастеризованному.

Метод определения кислой фосфатазы

Кислая фосфатаза инактивируется при температуре пастеризации мо­лока и сливок 85 °С с выдержкой не менее 30 мин, 90 °С с выдержкой не менее 5 мин и кипячении; термической обработки сливок 103 °С с выдержкой 15–20 с.

Метод определения кислой фосфатазы предназначен для контроля эффективности термической обработки.

Аппаратура, материалы и реактивы:

Подготовка к анализу. Приготовление буферного раствора. В мерную колбу вместимостью 1000 см 3 вносят 72 см 3 ледяной уксусной кисло­ты, доводят до метки дистиллированной водой и перемешивают. Затем подщелачивают концентрированным раствором гидроокиси натрия до (3,78 ± 0,05) рН.

Приготовление осадителя системы цинк-медь. В мерную колбу вме­стимостью 1000 см 3 вносят (150,00 ± 0,05) г сернокислого цинка и (30,00 ± 0,05) г сернокислой меди, растворяют в дистиллированной во­де, доводят объем до метки дистиллированной водой и перемешивают.

Приготовление 3 моль/дм 3 раствора аммиака и определение его кон­центрации. В мерной колбе вместимостью 1000 см 3 разбавляют 333 см 3 аммиака с массовой долей 25 % до метки дистиллированной водой. Концентрацию раствора аммиака проверяют 0,2 моль/дм 3 раствором соляной кислоты, используя в качестве индикатора раствор с массо­вой долей 0,1 % метилового оранжевого. В коническую колбу вносят 1 см 3 исследуемого раствора аммиака, 50 см 3 дистиллированной воды, 1–2 капли индикатора, перемешивают и титруют 0,2 моль/дм 3 соляной кислотой. Концентрацию аммиака устанавливают по формуле:

Раствор аммиака хранят в плотно закупоренной посуде. Перед взя­тием аммиака содержимое бутылки перемешивают.

Проведение анализа. Приготовление опытной пробы. Исследуемое молоко или сливки вносят по 1 см 3 в три пробирки. В одну из проби­рок с молоком или сливками добавляют 10 см 3 раствора динатриевой соли фенилфосфорной кислоты и 4-аминоантипирина, перемешива­ют, помещают в водяную баню или ультратермостат с температурой (36 ± 1) °С. Через одинаковые промежутки времени, например 1 мин, вышеуказанную операцию проводят последовательно с остальными двумя пробирками. Продолжительность выдерживания каждой из трех пробирок в водяной бане или ультратермостате, контролируемая по се­кундомеру, составляет 90 мин. Затем вносят из бюретки вместимостью 25 см 3 или отмеривают пипеткой по 1 см 3 осадителя системы цинк-медь, 0,6 см 3 раствора с концентрацией аммиака 3 моль/дм 3 через те же промежутки времени, как и при смешивании с раствором соли фе­нилфосфорной кислоты и 4-аминоантипирина, перемешивают после добавления каждого реактива, фильтруют и выдерживают 60 мин при температуре (20 ± 5) °С.

Приготовление контрольной пробы. Контрольную пробу готовят сле­дующим способом: в три пробирки вносят по 10 см 3 раствора динатрие­вой соли фенилфосфорной кислоты и 4-аминоантипирина, выдержи­вают подобно опытным пробам при температуре (36 ± 1) ºС 90 мин. Пробирки вынимают из водяной бани или ультратермостата, добавля­ют по 1 см 3 осадителя системы цинк-медь, 1 см 3 исследуемых молока или сливок и 0,6 см 3 раствора с концентрацией аммиака 3 моль/дм 3 (перемешивание выполняют после каждой добавки), фильтруют и вы­держивают 60 мин при температуре (20 ± 5) ºС.

Во избежание попадания в содержимое пробирок постороннего фе­нола пробирки типа П2 закрывают фольгой, перемешивание выполня­ется 2-кратным переворачиванием пробирок на 180° и возвращением их в исходное положение.

Оценка результатов. При полной инактивации кислой фосфатазы в молоке или сливках окраска опытных проб не отличается от окра­ски контрольных проб. Следовательно, молоко и сливки подвергались пастеризации при температуре 85 °С с выдержкой не менее 30 мин, 90 °С с выдержкой не менее 5 мин и кипячению; сливки подвергались термической обработке при температуре 103 °С с выдержкой 15–20 с. В зависимости от активности кислой фосфатазы в молоке и сливках окраска опытных проб изменяет цвет от слабо-розового (но более яр­кого, чем окраска контрольных проб) до темно-вишневого. Следова­тельно, наличие активности кислой фосфатазы свидетельствует о не­соблюдении режимов термической обработки.

Источник