с помощью реакции агглютинации на стекле ора можно определить
С помощью реакции агглютинации на стекле ора можно определить
Развернутая реакция агглютинации ( РА ). Для определения AT в сыворотке крови больного ставят развёрнутую реакцию агглютинации ( РА ). Для этого к серии разведений сыворотки крови добавляют диагностикум — взвесь убитых микроорганизмов или частицы с сорбированными Аг. Максимальное разведение, дающее агглютинацию Аг, называют титром сыворотки крови.
Разновидности реакции агглютинации ( РА ) для выявления AT — кровяно-капельная проба на туляремию (с нанесением диагностикума на каплю крови и появлением видимых белёсых агглютинатов) и реакция Хаддльсона на бруцеллёз (с нанесением на каплю сыворотки крови диагностикума, окрашенного генциановым фиолетовым).
Ориентировочная реакция агглютинации ( РА )
Для идентификации выделенных микроорганизмов ставят ориентировочную РА на предметных стёклах. Для этого к капле стандартной диагностической антисыворотки (в разведении 1:10, 1:20) добавляют культуру возбудителя. При положительном результате ставят развёрнутую реакцию с увеличивающимися разведениями антисыворотки.
Реакцию считают положительной, если агглютинацию наблюдают в разведениях, близких к титру диагностической сыворотки.
О-Аг. Соматические О-Аг термостабильны и выдерживают кипячение в течение 2 ч. При взаимодействии с AT образуют мелкозернистые агрегаты.
Н-Аг. Н-Аг (жгутиковые) термолабильны и быстро разрушаются при 100 °С, а также под действием этанола. В реакциях с Н-антисывороткой через 2 ч инкубации образуют рыхлые крупные хлопья (образованы бактериями, склеившимися жгутиками).
Vi-Ar брюшнотифозных бактерий относительно термостабилен (выдерживает температуру 60-62 °С в течение 2 ч); при инкубации с Vi-антисывороткой образуется мелкозернистый агглютинат.
Реакции прямой гемагглютинации
Простейшая из подобных реакций — агглютинация эритроцитов, или гемагглютинация, применяемая для определения групп крови в системе AB0. Для определения агглютинации (или её отсутствия) используют стандартные антисыворотки с анти-А и анти-В-агглютининами. Реакция называется прямой, так как исследуемые Аг — естественные компоненты эритроцитов.
Общие с прямой гемагглютинацией механизмы имеет вирусная гемагглютинация. Многие вирусы способны спонтанно агглютинировать эритроциты птиц и млекопитающих, их добавление к суспензии эритроцитов вызывает образование агрегатов из них.
С помощью реакции агглютинации на стекле ора можно определить
Простые реакции обычно включают два компонента — Аг и AT. К простым реакциям относят РА, реакции преципитации (РП) в жидкостях и гелях, реакции пассивной гемагглютинации (РПГА) и опсоно-фагоцитарные реакции. Простыми реакциями считают и косвенные (трёхком-понентные) реакции, в состав которых входят реагирующие системы (животные, эритроциты и т.д.), например, реакции нейтрализации (РН) возбудителя, РН Аг и реакции торможения гемагглютинации (РТГА).
Реакция агглютинации (РА)
Реакция агглютинации (РА) [от лат. agglutinatio, склеивание] позволяет выявить корпускулярные Аг, точнее Аг, локализованные на поверхности сравнительно крупных частиц (микроорганизмы, клетки различного происхождения). Механизм РА описывает «теория решётки», согласно которой двухвалентное AT взаимодействует одним активным центром с детерминантой одной молекулы Аг, а другим — с детерминантой второй молекулы Аг (рис. 10-13).
Рис. 10-13. Схема реакции агглютинации. А — отрицательный результат обусловлен отсутствием AT, специфичных к Аг. Б — положительный результат с образованием аггпютината наблюдают при наличии AT, специфичных к определяемому Аг; визуализация аггпютината возможна при образовании «решётки». В—ложноотрицательный результат возможен при развитии феномена прозоны, когда молекул AT недостаточно для образования «решётки» (1) или имеется избыток AT, также препятствующий её образованию (2).
В результате подобного взаимодействия образуется агглютинат. Его формирование невозможно при дефиците или избытке AT. Реакция агглютинации проявляется склеиванием корпускулярных Аг под воздействием AT (агглютининов) и реализуется в изотоническом растворе электролита, например 0,9% раствора NaCl. В реакции агглютинации также можно определять и содержание AT в сыворотке крови больных, например, брюшным тифом (реакция Видаля) или бруцеллёзом (реакция Райта).
Алгоритм постановки реакции агглютинации на стекле (ОРА)
Ориентировочная карта основ действий
Практического занятия
Тема: «Иммунобиологические методы исследования. Реакция агглютинации, реакция латекс-агглютинации»
План:
1. Дать понятие об иммунобиологических методах исследования:
-диагностические препараты: диагностические сыворотки и диагностикумы.
2. Научить учащихся подготовке посуды и ингредиентов для серологических реакций.
3. Обучить постановке ориентировочной реакции агглютинации на стекле, развернутой реакции агглютинации в пробирках.
4. Изучить реакцию латекс-агглютинации
Задание № 1.
Ознакомьтесь с инструкцией для проведения практического занятия.
Задание № 2.
Изучите основные понятия темы.
Для проведения серологических реакций используют: диагностические иммунные сыворотки и диагностикумы.Иммунные сыворотки готовят из крови людей или животных, иммунизированных определенным антигеном, которые лиофилизируют и указывают их титр. Сухую сыворотку растворяют в дистиллированной воде до первоначального объема.
а) Нативные (неадсорбированные)- неспецифичны, способны давать перекрестные реакции;
В качестве диагностикумов применяют взвеси живых или убитых микробов, фракции микробных клеток, токсины бактерий.
Задание № 3.
Изучите основные требования, предъявляемые к посуде и компонентам, используемым в серологическом методе исследования.
1. Посуда для серологических реакций должна быть чистой и сухой, стерилизация для нее необязательна.
Пробирки, пипетки не следует помещать в растворы дезинфицирующих веществ, кислот и щелочей. Стекло кипятят в простой воде, а пипетки затем просушивают этиловым спиртом и эфиром.
2. Для серологического исследования кровь (у обследуемого) берут натощак (во избежание мутноватости сыворотки, т. е. хилезности) из локтевой вены или уколом из пальца.
3. Любая серологическая реакция ставится в определенном объеме, все компоненты, участвующие в серологических реакциях, берутся в рабочих дозах (т.е. заранее разводятся) и в равных объемах.
4. Необходимо строго соблюдать последовательность внесения ингредиентов, участвующих в серологических реакциях, а также условия, обеспечивающие взаимодействие Аг и Ат.
5. На каждый из компонентов, участвующих в серологических реакциях, ставится контроль.
6. Учет любой серологической реакции начинают с проверки достоверности результатов в контролях
7. При серодиагностике серологические реакции с сывороткой крови одного обследуемого ставят 2 раза с интервалом в 7-10 дней, в динамике должно отмечаться нарастание титра антител в положительном случае. Только тогда диагноз заболевания считается правильным.
Задание № 4.
Изучите схему постановки реакции агглютинации на стекле. Поставьте ОРА.
Алгоритм постановки реакции агглютинации на стекле (ОРА)
1. На обезжиренное предметное стекло нанесите пипеткой 2 капли специфической адсорбированной агглютинирующей сыворотки и 1 каплю ИХН (изотонического раствора хлорида натрия).
а) Агглютинирующие адсорбированные сыворотки для постановки РА на стекле не, разводят, а только растворяют (если они были сухие).
б) Неадсорбированные агглютинирующие сыворотки предварительно разводят в соотношении 1:50-1:100.
в) Капли вносятся так, что бы между ними было расстояние.
2. Культуру петлей (или пипеткой) внесите в каплю физиологического раствора («КА») и в одну из капель сыворотки («0»). Капля сыворотки, в которую не внесена культура, является «КС».
3.Реакция протекает при комнатной температуре в течение 1-3 минут.
— Нельзя переносить культуру из сыворотки в каплю с ИХН.
— Культуру петлей тщательно растирают на стекле на границе с каплей, а потом вносят в каплю.
Задание № 5. Учтите реакцию агглютинации на стекле.
«КС» должен оставаться прозрачным, а в «КА» должна наблюдаться равномерная муть. Если в капле, где культура смешанна с сывороткой, появляются хлопья агглютинина на фоне прозрачной жидкости, то результат реакции считают положительным. Положительный результат РА свидетельствуют о гомологичности (соответствии друг другу) АГ и АТ. При отрицательном результате реакции в капле «О» будет равномерная муть, как в капле «КА», что свидетельствует о несоответствии Аг и Ат.
1. Реакция видна отчетливее, если ее рассматривать на темном фоне в проходящем свете.
2. При ее изучении можно пользоваться лупой.
«+» капля прозрачна равномерная муть
Результат: реакция агглютинации с поливалентной агглютинирующей эшерихиозной ОКА сывороткой положительна.
Заключение: Выделены Esсherichia coli
Задание №6. Изучите схему постановки развернутой реакций агглютинации (РРА)
| Ингредиенты, мл | Пробирки | ||||||
| Опытные пробирки. Разведение сыворотки | Контроли | ||||||
| 1:100 | 1:200 | 1:400 | 1:800 | 1:1600 | сыво- ротки | анти- гена | |
| Изотонический раствор, мл | 1.0 | 1.0 | 1.0 | 1.0 | 1.0 | 1.0 | 1.0 |
| Сыворотка1:50, мл |  1.0 | 1.0 | 1.0 | 1.0 | 1.0 | 1.0 | — |
| Диагностикум, капли | 1-2 | 1-2 | 1-2 | 1-2 | 1-2 | 1-2 | |
| Инкубация в термостате при t=37 0 С. Предварительный учет через 2 часа. Окончательный – спустя 18-12 часов( при комнатной температуре) | |||||||
| Учет результатов |  |  |   |   |   | прозрачна |  |
Примечание. Стрелки указывают перенос жидкости из пробирки в пробирку; из 5-й пробирки и пробирки контроля сыворотки 1,0 мл выливают в дезинфицирующий раствор.
Контроль сыворотки должен быть прозрачным, в контроле антигена должна наблюдаться равномерная муть;
В опыте, если сыворотка гомологична антигенам диагностикума, то образуется осадок в виде «зонтика», а жидкость над осадком прозрачна. Если антитела сыворотки и антигены диагностикума негомологичны, то появляется осадок в виде «пуговки». Титр сыворотки — это ее максимальное разведение, в котором еще происходит агглютинация.
Интенсивность реакции выражают следующим образом:
++++ все клетки осели, жидкость в пробирке совершенно прозрачна. Результат реакции резко положительный.
+++ осадок меньше, нет полного просветления жидкости. Результат реакции положительный.
++ осадок еще меньше, жидкость мутная. Результат реакции слабо положительный.
+ незначительный осадок, жидкость мутная. Сомнительный результат реакции.
— осадка нет, жидкость равномерно мутная, как в контроле антигена. Отрицательный результат реакции.
В приведенном примере максимальный титр равен 1:200.
Заключение: Титр сыворотки в реакции агглютинации с эшерихиозным К- диагностикумом равен 1:200
Задание №8.
Латекс-агглютинация — реакция пассивной агглютинации, при которой частицы латекса, нагруженные антигеном (белками, полисахаридами, гаптенами), агглютинируются специфическими антителами. Частицы полистирольного латекса здесь играют роль носителей антигена и являются «мостиками» между молекулами антител.
Внимание:основным условием успешной постановки ЛАГ является строгое соблюдение количественных соотношений компонентов системы.
В опытной капле к 50 мкл исследуемого материала (сыворотки обследуемого) добавляют 10 мкл латекс-препарата, сенсибилизированного антигенами.
Специфичность ЛАГ контролируют с помощью трех контрольных тестов, содержащихся в коммерческих тест-системах: заведомо положительный контроль, заведомо отрицательный контроль.
Перечень умений и навыков, подлежащих усвоению и закреплению на занятии:
1. Забор, доставка, регистрация, хранение и утилизация инфицированного материала
2. Проведение подготовки исследуемого материала, посуды, инструмента для микробиологического исследования
3. Соблюдение правил противопожарной безопасности в бактериологической лаборатории.
4. Соблюдение правил санитарно- гигиенического и противоэпидемического режима в бактериологической лаборатории
5.Постановка реакций агглютинации, интерпретация полученных результатов.
Вопросы для закрепления
1. Что называют серологическими свойствами бактерий?
2. С помощью каких методов выявляют эти свойства?
3. Какие серологические реакции вы знаете?
4. Расскажите о правилах сбора крови для получения сыворотки.
5.Каковы способы получения сыворотки крови?
6. Какие виды сывороток вы знаете?
7. Какие сыворотки называют моно- и поливалентными?
8. Какие сыворотки называют адсорбированными и неадсорбированными?
9. Перечислите основные компоненты для проведения ОРА.
10.Расскажите о технике проведения ОРА.
11. Как учитывают результаты ОРА?
12. Перечислите основные компоненты для проведения РРА
13. Расскажите о технике проведения РРА.
14. Как учитывают результаты РРА?
15. Перечислите основные компоненты для проведения ЛАГ.
16. Расскажите о технике проведения ЛАГ.
17. Каковы принципы учета результатов ЛАГ?
Домашнее задание: Учебник Ф.К. Черкес, с. 198-205.
Серологические исследования
Серология что это?
Серология (от лат. serum — «сыворотка», logos — «наука») представляет собой раздел иммунологии, который изучает специфику взаимодействия сывороточных антител с антигенами.
Основа диагностики — обнаружение специфических антител, которые образуются в качестве реакции на инфицирование организма определенным антигеном. В зависимости от того, какие антитела обнаружены в крови, делается вывод о характере инфекции, а количество этих антител говорит о степени активности инфекционного заболевания.
Материал, взятый на исследование в рамках серологического анализа крови, изучается на предмет наличия ВИЧ-инфекции, сифилиса и других опасных заболеваний — гepпeса, кишечных инфекций, краснухи, токсоплазмоза, xлaмидиоза, кори, вирусных гепатитов, xлaмидиоза. Кроме того, это исследование позволяет утвердить группу крови, определить специфичность белков.
Итак, серологические исследования проводят:
Таким образом серологический анализ крови помогает поставить диагноз или назначить наиболее эффективное лечение — при минимальных временных и финансовых затратах.
К достоинствам серологических исследований можно отнести:
Как проводится серологическое исследование
Забор крови проводится из локтевой вены. Важный момент — кровь берется не шприцом, а самотеком — в вену вводится игла без шприца и собирается в пробирку до пяти мл крови. Проводится процедypa с утра натощак.
В зависимости от реакций, которые лежат в основе исследования, выделяют несколько видов процедур:
К сдаче анализа необходимо подготовиться: за четыре дня пациент должен отказаться от приема сердечных препаратов, нужно также исключить алкоголь в любом его проявлении, острую и жирную еду, сладости, ограничить физические усилия, избегать стрессов.
Если не соблюдать эти правила, повышается риск ложноположительного результата. Перед назначением повторной сдачи анализов врач обязательно должен выяснить, что делал пациент за день до процедуры, и дать рекомендации по правильной подготовке к обследованию.
Серологический анализ: расшифровка
Серологическое исследование крови — анализ, который позволяет определить/подтвердить тип возбудителя инфекции, помогает специалисту поставить диагноз. Это незаменимая помощь, если врач не может подобрать лекарственную терапию, так как возбудители различных заболеваний отличаются разной чувствительностью к действию конкретных лекарств и антибиотиков.
После того, как процедypa сбора материала закончена, лаборанты приступают к следующему этапу — расшифровывают показатели. Так, если в крови у пациента антитела не обнаружены, можно делать вывод, что в организме нет инфекций — результат анализа в таком случае положительный.
Но такое положение вещей, скорее, исключение из правил: если есть симптомы заболевания, серологические исследования выявляют и доказывают наличие серьезной патологии в организме.
Сначала в организме с помощью анализа находят возбудителей заболеваний, далее оценивают количество антител, на основании чего делают вывод о том, насколько серьезно развита инфекция.
Серологическое исследование на гепатит, ВИЧ, сифилис: особенности
Сифилис. При проведении анализа на сифилис специалисты ищут белки, отвечающие за поступление в человеческий организм возбудителя инфекции — речь идет о трепонеме бледной. В качестве биологического материала в этом случае выступает сыворотка крови.
Гепатиты. Вирусные гепатиты — серьезные инфекционные заболевания, опасность которых заключается в том, что они достаточно долгое время могут жить в организме, никак себя не проявляя. Выявить заболевание в ранней фазе, когда оно лучше поддается лечению, можно проведя анализ на маркеры — маркеры появляются в крови после перенесенного заболевания или введения вакцины.
Нужно понимать, что выявление возбудителя возможно только через 1,5-2 месяца после инфицирования. Если анализ сдает беременная женщина, возможен ложноположительный результат.
Рекомендуем к просмотру медицинский сайт https://tabletix.ru/. На сайте найдете полезную информацию, врачебные мнения.
Если вы наблюдаете один или несколько из симптомов, указанных ниже, стоит задуматься о сдаче серологического анализа:
ВИЧ. Если анализ на ВИЧ показал положительный результат, это не говорит о том, что пациент инфицирован СПИДом. Если заражение произошло недавно (не более двух месяцев назад), наличие антител не позволяет определить факт развития заболевания. Назначается повторное исследование.
Серологический анализ крови — важнейший метод исследования, основное назначение которого заключается в оперативном выявлении вирусов, инфекций, микробов в организме.
Этот уникальный лабораторный «инструмент» позволяет определить любое заболевание, которое является следствием угнетения иммунитета, поэтому не ленитесь, а регулярно сдавайте анализ, чтобы иметь возможность вовремя выявить болезнь и быстро от нее избавиться.
Серологические реакции в лабораторной диагностике инфекционных заболеваний.
В защите организма от чужеродных антигенов решающую роль играют иммунологические механизмы, осуществляющиеся антителами и иммунокомпетентными клетками. Основа иммунологических механизмов – специфическая реакция между антителами или лимфоцитами (образовавшихся под воздействием попавшего в организм антигена) и антигена. Главная функция антител – связывание антигена и его дальнейшее выведение из организма.
Однако такие реакции между антителами и антигенами могут происходить и вне организма (in vitro) в присутствии электролита и возможны лишь при наличии комплементарности (структурного сходства, сродства) антигена и антитела.
Имея специфические антитела против определенного антигена можно распознать и выявить его среди других антигенов, а в сыворотке крови антитела против известного антигена.
Реакция антиген-антитело in vitro сопровождается возникновением определенного феномена – агглютинации, преципитации, лизиса.
Таким образом все серологические реакции используются с двумя целями:
1) выявление антител в сыворотке больного с помощью стандартных антигенов-диагностикумов (для серологической диагностики инфекционных болезней);
2) для выявления неизвестных антигенов по известным стандартным сывороткам, содержащим антитела определенной специфичности (для серологической идентификации возбудителей).
Например, если сыворотка больного реагирует с конкретным микробным антигеном – значит в сыворотке больного есть антитела против данного микроорганизма.
Серологическая диагностика – берут стандартный антиген (диагностикум), представляющий собой инактивированные или живые бактерии, вирусы или же их антигены (компоненты) в изотоническом растворе.
Серологическая идентификация – используют стандартные иммунные сыворотки, которые получают от иммунизированных животных (в крови животных в результате многократной иммунизации возбудителем появляется большое количество антител).
Агглютинация.
Агглютинация – серологическая реакция между антителами (агглютининами) и антигенами (агглютининогенами), размещенными на поверхности бактериальной клетки, а в результате образуется комплекс антиген-антитело (агглютинат).
Механизм агглютинации – под влиянием ионов электролита уменьшается негативный поверхностный заряд бактериальной клетки и следовательно они могут сблизиться на такое расстояние при котором возникает склеивание бактерий.
Макро- и микроскопический вид агглютината:
1) О-агглютинация (соматическая) – мелкозернистая, при микроскопии – бактерии склеиваются полюсами клеток, образуя сеть.
2) Vi-агглютинация (капсульная) – мелкозернистая, при микроскопии — склеивание бактерий происходит всей поверхностью клетки.
3) Н-агглютинация (жгутиковая) – агглютинины взаимодействуют с жгутиками обездвиживая бактерии, при микроскопии – крупнохлопчатая, склеивание бактериальных клеток в области жгутиков.
Реакция агглютинации используется для определения антител в сыворотке крови больных, например, при бруцеллезе (реакции Райта, Хеддельсона), брюшном тифе и паратифах (реакция Видаля) других инфекционных болезнях, а также при определении возбудителя, выделенного от больного. Эту же реакцию применяют для определения групп крови с использованием моноклональных антител против аллоантигенов эритроцитов.
Применяются различные варианты реакции агглютинации: развернутая, ориентировочная, непрямая и др.
Для определения у больного антител ставят развернутую реакцию агглютинации:к разведениям сыворотки крови больного добавляют взвесь убитых микробов (диагностикум)и через несколько часов инкубации при 37°С отмечают наибольше разведение (титр) сыворотки, при котором произошла агглютинация, т.е. образовался осадок.
Характер и скорость агглютинации зависят от вида антигена и антител.
Если необходимо определить возбудитель, выделенный от больного, ставят ориентировочную реакцию агглютинации,применяя диагностические антитела, т.е. проводят серотипирование возбудителя. Ориентировочную реакцию проводят на предметном стекле. К 1 капле диагностической иммунной сыворотки в разведении 1:10 или 1:20 добавляют чистую культуру возбудителя, выделенного от больного. Если появляется хлопьевидный осадок, то реакцию проводят в пробирках с увеличивающимися разведениями диагностической сыворотки, добавлял в каждую дозу сыворотки 2—З капли взвеси возбудителя. Реакцию считают положительной, если агглютинация отмечается в разведении, близком к титру диагностической сыворотки. В контролях (сыворотка, разведенная изотоническим раствором хлорида натрия, или взвесь микробов в том же растворе) осадок в виде хлопьев должен отсутствовать.
Разные родственные бактерии могут агглютинироваться одной и той же диагностической агглютинирующей сывороткой, что затрудняет их идентификацию. Поэтому пользуются адсорбированными агглютинирующими сыворотками,из которых удалены перекрестно реагирующие антитела путем адсорбции их родственными бактериями. В таких сыворотках сохраняются антитела, специфичные только к данной бактерии. Получение таким способом монорецепторных диагностических агглютинирующих сывороток было предложено А.Кастелляни (1902).
Реакция непрямой (пассивной) гемагглютинации (РНГА) основана на использовании эритроцитов (или латекса) с адсорбированными на их поверхности антигенами или антителами, взаимодействие которых с соответствующими антителами или антигенами сыворотки крови больных вызывает склеивание и выпадение эритроцитов на дно пробирки или ячейки в виде фестончатого осадка. РНГА применяют для диагностики инфекционных болезней, определения гонадотропного гормона в моче при установлении беременности, для выявления повышенной чувствительности к лекарственным препаратам и гормонам и в некоторых других случаях.
Реакция торможения гемагглютинации (РТГА) основана на блокаде, подавлении вирусов антителами иммунной сыворотки, в результате чего вирусы теряют свойство агглютинировать эритроциты. РТГА применяют для диагностики многих вирусных болезней, возбудители которых (вирусы гриппа, кори, краснухи, клещевого энцефалита и др.) могут агглютинировать эритроциты различных животных.
Реакцию агглютинации для определения групп крови применяют для установления системы АВО с помощью РА эритроцитов, используя антитела к группам крови А(II), В(III). Контролем служит сыворотка, не содержащая антител, т.е. АВ(IV) группы крови, антигены, содержащиеся в эритроцитах групп А(II), В(III); отрицательный контроль не содержит антигенов, т.е. используют эритроциты группы 0 (I).
В реакции агглютинации для определения резус-фактора используют антирезусные сыворотки (не менее двух различных серий). При наличии на мембране исследуемых эритроцитов резус-антигена происходит агглютинация этих клеток. Контролем служат стандартные резус-положительные и резус-отрицательные эритроциты всех групп крови.
Реакцию агглютинации для определения антирезусных антител (непрямую реакцию Кумбса) применяют у больных при внутрисосудистом гемолизе. У некоторых таких больных обнаруживают антирезусные антитела, которые являются неполными. Они специфически взаимодействуют с резус-положительными эритроцитами, но не вызывают их агглютинации. Наличие таких неполных антител определяют в непрямой реакции Кумбса. Для этого в систему антирезусные антитела + резус-положительные эритроциты добавляют антиглобулиновую сыворотку (антитела против иммуноглобулинов человека), что вызывает агглютинацию эритроцитов. С помощью реакции Кумбса диагностируют: патологические состояния, связанные с внутрисосудистым лизисом эритроцитов иммунного генеза, например гемолитическую болезнь новорожденных: эритроциты резус-положительного плода соединяются с циркулирующими в крови неполными антителами к резус-фактору, которые перешли через плаценту от резус-отрицательной матери.
Реакция коагглютинации— разновидность РА: клетки возбудителя определяют с помощью стафилококков, предварительно обработанных иммунной диагностической сывороткой. Стафилококки, содержащие белок А, имеющий сродство к иммуноглобулинам, неспецифически адсорбируют антимикробные антитела, которые затем взаимодействуют активными центрами с соответствующими микробами, выделенными от больных. В результате коагглютинации образуются хлопья, состоящие из стафилококков, антител диагностической сыворотки и определяемого микроба.
Схема постановки реакции агглютинации.
Что показывает серологический анализ крови?
Что показывает серологический анализ крови? Диагностические мероприятия – это важнейший этап в терапии любого заболевания. Успех лечения зависит не только от назначенных препаратов, но и во многом от того, насколько правильно был поставлен диагноз.
Кроме того, диагностика позволяет предотвратить осложнения и сопутствующие заболевания. С помощью серологического анализа крови пациента выявляют наличие антител и антигенов. Исследование помогает найти множество заболеваний, определить их фазу и контролировать прохождение лечения.
Что такое серология?
Серологией называется отрасль иммунологии, изучающая реакции антигенов на антитела. Данный раздел медицины занимается изучением плазмы крови и ее иммунологических характеристик.
На сегодняшний день серологический анализ крови на антитела – это надежный способ выявления вируса иммунодефицита человека, гепатита, бруцеллеза, ЗППП и других опасных для жизни заболеваний. Разберемся, в каких случаях его назначают.
Показания к назначению
Серологический анализ крови необходим для выявления возбудителя болезни при затруднениях в постановке диагноза.
Для проведения этой реакции в плазму вводят антигены возбудителей, а затем протекающий процесс изучает лаборант. Либо осуществляют обратную реакцию: в инфицированную кровь вводят антитела для определения конкретной принадлежности возбудителя.
Сфера применения
Данное исследование используют в различных отраслях медицины. С помощью этой реакции выявляют специфические клетки и антитела, выpaбатываемые организмом для того, чтобы бороться с инфекциями и вирусами.
Кроме этого, с помощью серологического метода определяется группа крови человека.
Подобное серологическое исследование анализа крови используют в гинекологии для диагностики болезней, передаваемых пoлoвым путем. Практикуется такой метод и для комплексных обследований беременных женщин (выявление токсоплазмоза, ВИЧ, сифилиса и т. д.). Прохождение этого теста является обязательным при постановке на учет в женской консультации.
У детей серологическая реакция используется для подтверждения диагноза так называемых «детских» заболеваний (ветрянки, кори, краснухи и т. д.) в том случае, если симптоматика не имеет выраженных проявлений и невозможно выявить болезнь, анализируя клинические показания.
Выявление венерических заболеваний
Для венерологов это тестирование поистине незаменимо и позволяет поставить диагноз очень точно.
При смазанной клинической картине серологический анализ крови на сифилис, лямблиоз, уреаплазмоз, xлaмидиоз, гepпeс и другие заболевания позволяет быстро выявить наличие антител.
Вирусные и инфекционные заболевания
Серологический анализ активно используется гастроэнтерологами, гепатологами и инфекционистами для диагностики вирусного гепатита.
Терапевт также может назначить прохождение этого анализа в случае подозрений на инфекционные и вирусные заболевания. Для того чтобы подтвердить диагноз, проводится серологический анализ крови на паразитов с целью определения специфических антител. Это делается при энцефалите, бруцеллезе, аллергических реакциях.
Расшифровка серологического анализа крови дает возможность определить стадию протекания заболевания и ответить на вопрос, насколько необходима госпитализация в данный момент. Как правильно подготовиться?
Подготовка к сдаче анализа
Серологический анализ крови делают и в государственных, и в коммерческих клиниках. Предпочтение стоит отдать лаборатории, располагающей современным оборудованием и квалифицированным персоналом.
Биологическими образцами для исследования могут быть слюна и кал, но в большинстве случаев используется венозная кровь больного. Кровь для серологического теста берут из локтевой вены в условиях лаборатории. Перед тем как сдавать анализ, следует проконсультироваться с врачом по поводу подготовки к этой процедуре.
Для подготовки к сдаче анализа на серологическое исследование нужно соблюсти несколько несложных правил.
Кровь сдают в спокойном состоянии до приема пищи, то есть натощак. Перед этим не следует проходить другие исследования, например делать рентген, УЗИ и т. д.
Нужно исключить прием антибактериальных и некоторых других препаратов за несколько недель до сдачи крови. Определенные рекомендации в этом случае зависят от того заболевания, на которое делается тест. К примеру, исследование на гепатит предполагает исключение жирной пищи и алкоголя за 48 часов до процедуры.
Реакция флюоресценции
Среди разновидностей серологических реакций существует реакция флюоресценции. По этой методике используется реагент, подсвечивающий антитела в сыворотке крови.
Постановка серологической реакции прямого типа предполагает маркировку специфических антител флюоресцирующим веществом. Такая реакция является самой быстрой и проводится одноэтапно.
Другой вариант проведения такого анализа имеет название непрямого, или РНИФ. Проводится он в два этапа. На первом этапе антитела не маркируются флюоресцирующими метками, а на втором применяются соответственно отмеченные антитела для определения антигенов и антител. Свечение возникает только после того, как происходит связывание со специфическим антителом.
Что же показывает серологический анализ крови? Итог всей процедуры оценивает специальный прибор, который анализирует силу излучения, выявляет форму и размер исследуемого объекта. Возбудители инфекционных заболеваний выявляются с результатом, достоверность которого составляет 90-95 %, в зависимости от вида и стадии патологии.
Иммуноферментный анализ
В этих видах серологического исследования применяются уникальные стабильные реагенты. Отмеченные вещества как бы приклеиваются к искомым антителам. В итоге мы получаем качественный или количественный результат.
Если выраженных маркеров не обнаружилось, то результат будет считаться отрицательным. Если присутствие антител в биологических образцах при качественном исследовании обнаружено, то результат анализа считается положительным. При количественном определении клеток анализ дает более точный результат.
Анализируя показатели анализа (например, сумму выявленных клеток) специалист определяет, находится ли заболевание на начальном этапе, в острой стадии, или это обострилась хроническая форма патологии. Для того чтобы поставить диагноз, врач учитывает не только данные серологического исследования, но и клиническую картину заболевания.
Особенности данного теста
Проведение данного анализа не всегда способно дать 100%-ную уверенность в том, что определенное заболевание обнаружено. Бывает так, что результаты могут быть неоднозначными и требуется проведение других процедур.
Например, во время исследования на бруцеллез сыворотка крови проходит контроль на самозадержку без антигена. Это существенно повышает достоверность тестирования. Анализ на бруцеллез может иметь положительное или отрицательное значение, а также вызывать сомнения.
При получении сомнительных результатов, не имеющих однозначной трактовки, рекомендовано сдать анализ повторно. Кроме того, бруцеллез можно выявить в результате посевов крови, исследовав костный мозг и спинно-мозговую жидкость.
Плюсы серологического анализа крови
Диагностические методики с использованием серологических реакций обширно используются в современной медицинской практике. Особенно часто это делается при определении вирусных и инфекционных патологий.
Эти же анализы применяются при проведении географического скрининга и медицинского обследования с целью предупреждения эпидемиологического распространения инфекции.
К достоинствам метода можно отнести:
Минусы метода
Однако серологические исследования имеют и свои недостатки.
К ним относится тот факт, что при проведении анализа следует учитывать инкубационный период заболевания, для того чтобы получить более достоверную картину.
К примеру, определение простого гepпeса первого или второго типа возможно лишь спустя 14 дней с момента заражения. Анализ на наличие вируса иммунодефицита проводят через 30 дней, через 90 дней и спустя полгода после контакта с инфицированным человеком.
Безусловно, на достоверность результатов может оказывать влияние и человеческий фактор: пренебрежение правилами подготовки к забору крови или ошибка, допущенная лаборантом при проведении реакции.
По статистике, ошибочный результат может быть получен в 5 % случаев. Опытный врач при обследовании пациента, изучив клиническую картину, в большинстве случаев может вычислить допущенную ошибку.
Серологическое исследование крови
Что такое серологическое исследование крови?
Объект серологии — антигены и антитела
Серологическое исследование (СИ) основано на способности антигенов и антител связываться друг с другом. СИ позволяет с точностью выявить наличие у пациента определённого вируса либо бактерии, группу крови и резус, реактивность организма к антибиотикам, аутоиммунные заболевания, гормональные нарушения, индивидуальную специфичность белков, определить эффективность терапии.
Система иммунитета борется с проникающими в организм болезнетворными микробами (антигенами) при помощи антител, при этом создавая к каждому из вирусов, паразитов либо бактерий свой определённый тип защиты.
Способность иммунитета выpaбатывать особые вещества, нейтрализующие вредоносные частицы, была известна учёным давно. Но увидеть реакцию антиген-антитело в лабораторных условиях удалось только в конце XIX века. Было обнаружено, что в результате образования связки, комплексы выпадают в осадок, образуя хлопья либо помутнение. Такие реакции получили названия агглютинации и преципитации. В XX веке серология — наука о свойствах сыворотки, стремительно развивалась, обнаруживались новые методы диагностирования на основе реакций антиген-антитело. На сегодняшний день существует множество способов выявления иммунных комплексов, а СИ являются незаменимым звеном в диагностике, лечении, создании новых медицинских препаратов и вакцин.
Показания к проведению анализа.
Серологические исследования широко применяется в акушерстве
Серологические исследования сопровождают современного человека на протяжении всей жизни. Первые анализы на выявление определённых антител проводятся, когда малыш находится ещё в утробе. Беременная женщина сдаёт кровь на различные СИ для определения возможного резус-конфликта либо инфекций, способных навредить вынашиваемому плоду. Когда ребёнок появляется на свет, его ожидают серологические исследования, позволяющие диагностировать врождённые заболевания. Впоследствии анализы сдаются по следующим причинам:
Подготовка к исследованию.
Прием препаратов желательно отменить накануне теста
Так как серологические исследования охватывают широкий спектр анализов, в каждом конкретном случае может понадобиться определённая подготовка, но существуют общие правила сдачи серологического теста:
Методы проведения серологического исследования.
В серологии может применяться большое число методов
Все методики определения комплексов антиген-антитело (Аг-Ат) основываются на использовании известного Аг либо Ат в поиске неизвестного. Если необходимо обнаружить Аг, необходимы диагностические иммунные сыворотки с содержанием специфических Ат. Если целью СИ является выявление Ат, используются диагностикумы — взвеси, содержащие определённые Аг.
Серологические анализы могут отражать качественный либо количественный результат. При качественном исследовании итог может быть отрицательный или положительный, то есть искомый элемент либо обнаружен, либо нет. Количественный итог выражается в виде числового значения либо знаками «+» (обычно от одного до четырёх).
Непрямая гемагглютинация — один из методов диагностики
Методы серологических исследований:
Иммунофлюорисцентный метод.
«Свечение» в темнопольном микроскопе
Данный метод основан на использовании Ат, меченных флуоресцентным веществом. Чаще всего в качестве метки используется флуоресцеинизотиоционат, обладающий зелёным свечением в лучах ультрафиолета. Результат анализа оценивается по степени яркости свечения. Может быть использован ручной метод определения при помощи люминесцентного микроскопа, оптического микроскопа с люминесцентной насадкой, а также автоматический способ с применением микрочипового цитомера, проточного цитомера либо роботизированного флуоресцентного микроскопа.
РИФ проводится прямым и непрямым методом. Прямой способ означает непосредственное связывание сорбированного Аг с меченым Ат. Непрямой метод подразумевает использование немаркированных Ат для связки с Аг, а затем добавление меченых Ат, что позволяет избежать неспецифических реакций.
Иммуноферментный анализ.
Иммуноферментный анализ как метод серологической диагностики
ИФА основан на выявлении комплексов Аг-Ат при помощи маркирования одного из компонентов. В качестве метки используются различные ферменты, которые в результате ферментативной реакции образуют окрашивание. Существуют разнообразные методы ИФА, их можно классифицировать как гомогенные и гетерогенные методы.
Гомогенные означают, что все этапы реакции происходят в растворе.
Гетерогенные методы включают разделение на фазы с использованием твёрдого носителя.
Гомогенно-гетерогенные способы основываются на том, что комплексы Аг-Ат формируются в растворе, а затем для разделения используется твёрдая фаза.
Существует множество вариаций методов ИФА, некоторые из них представлены ниже.
Какие инфекции помогает выявить серологическое исследование.
Серологическая диагностика позволяет выявить возбудителя
Если у пациента присутствует определённая симптоматика либо иные исследования указывают на заболевание, назначается серологический анализ.
Серологические исследования используют для диагностики следующих инфекций:
Преимущества серологического метода исследования в диагностике инфекций.
Серологическая диагностика — быстро и доступно
СЕРОЛОГИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
Серологические исследования — это методы изучения определенных антител или антигенов в сыворотке крови больных, основанные на реакциях иммунитета. С их помощью также выявляют антигены микробов или тканей с целью их идентификации.
Обнаружение в сыворотке крови больного антител к возбудителю инфекции или соответствующего антигена позволяет установить причину заболевания.
Серологические исследования применяют также для определения антигенов групп крови, тканевых антигенов и уровня гумopaльного звена иммунитета.
Серологические исследования включают в себя различные серологические реакции:
1. Реакция агглютинации.
2. Реакция преципитации.
3. Реакция нейтрализации.
4. Реакция с участием комплемента.
5. Реакция с использованием меченых антител или антигенов.
Реакции агглютинации — это простые реакции склеивания корпускулярных антигенов с помощью антител.
Различают:
— прямые реакции агглютинации, которые используют для выявления антител в сыворотке крови больного. Добавление взвеси убитых микробов к сыворотке больного вызывает образование хлопьевидного осадка (положительная реакция склеивания микробов антителами). Используется для определения брюшного тифа, паратифа и др.
— реакция пассивной, или непрямой гемагглютинации основана на использовании эритроцитов с адсорбированными на их поверхности антигенами, взаимодействие которых с соответствующими антителами сыворотки крови больных приводит к образованию фестончатого осадка. Используется для определения беременности, выявления повышенной чувствительности больных к лекарственным препаратам и гормонам;
— реакция торможения гемагглютинации основана на способности антител иммунной сыворотки нейтрализовать вирусы, которые в результате теряют свойство склеивать эритроциты. Используется для диагностики вирусных болезней;
— реакция коагглютинации — разновидность реакции агглютинации, в которой антигены возбудителя определяют с помощью стафилококков, предварительно обработанных иммунной диагностической сывороткой.
Реакции преципитации — реакции, в которых происходит осаждение комплекса антиген-антитело. Антиген в данном случае должен быть растворимым. Осадок комплекса антиген-антитело называется преципитатом. Реакцию ставят путем наслоения раствора антигена на иммунную сыворотку. При оптимальном соотношении антиген-антитело на границе этих растворов образуется непрозрачное кольцо преципитата. Диаметр кольца преципитации пропорционален концентрации антигена. Наибольшее распространение получила реакция преципитации в полужидком геле агара (двойная иммуно-иммунодиффузия, иммуноэлектрофорез и др.). Реакцию используют для определения содержания в крови иммуноглобулинов различных классов, компонентов системы комплемента.
Реакция нейтрализации основана на способности антител иммунной сыворотки нейтрализовать повреждающее действие микроорганизмов или их токсинов на чувствительные клетки или ткани. При отсутствии повреждающего эффекта смеси антител и микробов или их токсинов на культуру клеток говорят о специфичности взаимодействия комплекса антиген-антитело.
Реакции с участием комплемента
Реакции с участием комплемента основаны на активации комплемента в результате присоединения его к комплексу антиген-антитело. Если комплекс антиген-антитело не образуется, то комплемент присоединяется к комплексу эритроцит-антиэритроцитарное антитело, вызывая тем самым гемолиз (разрушение) эритроцитов (реакция радиального гемолиза). Применяется для диагностики инфекционных болезней, в частности, сифилиса.
Реакция с использованием меченых антител или антигенов
Реакция основана на том, что антигены тканей или микробы, обработанные иммунными сыворотками, меченными флюорохромами, способны светиться в ультрафиолетовых лучах люминисцентного микроскопа (реакция иммунофлюоресценции).
В иммуноферментном анализе вместо флюорохромов иммунную сыворотку можно метить ферментом (пероксидазой хрена или щелочной фосфатазой). Реакцию оценивают по окрашиванию раствора в желто-коричневый (пероксидаза) или желто-зеленый (фосфотаза) цвет.
Радиоиммунологический метод — количественное определение антител или антигенов, меченых радионуклидами, с применением аналогичных антигенов или антител.
Методы применяют для выявления антигенов микробов, определения гормонов, ферментов, лекарственных веществ и иммуноглобулинов.