2аа эмбрион на 5 день
Оценка качества эмбрионов в программах ЭКО
Результаты экстракорпорального оплодотворения зависят от огромного количества факторов, однако именно эмбриологический этап процедуры имеет важнейшее, практически определяющее результат, значение.
Проведение манипуляций с человеческими эмбрионами, имеющими микроскопические размеры – это сложная область медицины. Поэтому в процессе работы врачи используют сложную терминологию. В данной статье Апрышко Валентина Петровна, заведующая лабораторией эмбриологии одной из московских клиник, расскажет о методах и критериях оценки качества эмбрионов.
Самостоятельно принимать решения, связанные с выбором эмбриона или даты его переноса в матку могут только специалисты-эмбриологи. Однако после прочтения данного материала вы начнете понимать медицинские обозначения типа «8С».
День первый
Сразу после оплодотворения доктор проверяет признаки того, что процедура ИКСИ, ПИКСИ или ЭКО проходит успешно. Для этого он смотрит, как выглядят пронуклеусы, и оценивает их:
Пронуклеусы – это ядра половых клеток (мужских и женских), которые еще не слились. Изучая их вид, можно оценивать перспективы, качество и жизнедеятельность будущих эмбрионов.
На данном этапе развития эмбрионов может формироваться множество патологий, которые ведут к их гибели. Например:
Плохие эмбрионы сразу отбраковывают. Нет смысла их пересаживать. Даже если они не погибают на этапе культивации, организм женщины сам отторгает такие зародыши. В результате если беременность наступает, она очень быстро прерывается. Это происходит уже в первые недели гестации.
День второй
На второй день культивации клетка делится на две. Образуются бластомеры.
Бластоме?ры — клетки эмбрионов на этапе дробления. Оплодотворенная яйцеклетка делится на две дочерние клетки, называемые бластомерами. Каждый бластомер делится на две новые дочерние клетки, которые также получают название бластомеров.
Критериями качества эмбриона на данном этапе являются его:
Чем больше внутри эмбриона бластомеров и чем меньше степень фрагментации, тем более качественным он считается. Такой зародыш имеет большой потенциал к дальнейшему нормальному развитию.
Многие эмбриологи используют классификацию, отражающую качество эмбрионов с помощью четырех букв латинского алфавита. Вот эта классификация:
Также в этой классификации используются цифры, которые отражают количество бластомеров. Чем их больше, тем продукт слияния мужской и женской половых клеток считается лучше. Например, эмбрион «4В» оценивается более высоко, чем «3С». Ведь в нем больше бластомеров и меньше фрагментация.
День третий
Нормальный эмбрион на третий день развития имеет от 7 до 9 бластомеров. Он уже начинает выполнять заложенную в нем генетическую программу.
На данном этапе многие зародыши прекращают свое развитие. Это происходит по причине наличия дефектов генетического материала.
«Блок развития» – так называют эмбриологи явление, которое обеспечивает естественный отбор. Процесс размножения весьма сложен. В ДНК часто случаются поломки. «Поломанные» эмбрионы останавливаются в развитии.
Оценка их качества происходит точно так же, как на второй день. Используется аналогичная классификация. Только бластомеров становится больше. Поэтому описываются они, например, как 8А.
День четвертый
Если бы развитие эмбриона происходило в естественных условиях, он попал бы в полость матки на четвертый день после оплодотворения. До этого времени он находится в маточной трубе.
На четвертый день зародыш состоит из 10-16 бластомеров. Он становится более компактным – занимает небольшой объем относительно количества клеток. Его поверхность выглядит более гладкой, чем на третий день.
Морула – так называется стадия развития эмбриона на данном этапе. В переводе это означает «тутовая ягода». Так эмбриологи назвали его именно за внешнее сходство с этой ягодой.
Заканчивается данная стадия кавитацией. Так называется процесс образования полости внутри эмбриона.
День пятый
На пятый день развития эмбрион достигает стадии, которая называется бластоциста. Это значит, что полость внутри эмбриона уже достигла 50% от его общего объема.
В отличие от предыдущих стадий развития, бластоциста состоит из разных клеток:
Именно на этой стадии в большинстве случаев врачи пересаживают эмбрион в матку женщины. Также их можно замораживать. Это делают, чтобы сохранить «лишние» эмбрионы на следующий цикл.
Весь эмбрион окружен блестящей оболочкой. После переноса эта оболочка разрывается. Бластоциста выходит наружу и встраивается в стенку матки. Этот процесс называется hatching, что означает «вылупление».
Некоторым супружеским парам проводят преимплантационную диагностику для раннего выявления хромосомных и генетических мутаций. В таком случае ПГД делают именно на данном этапе, когда часть клеток начинает выступать за внешнюю оболочку.
На данном этапе развития критериями качества эмбриона являются:
Размер внутренней полости оценивается цифрами, два других критерия – буквами.
Исходя из размеров, выделяют шесть степеней зрелости бластоцисты:
Клетки качественного эмбриона должны быть сгруппированными. Представьте себе теннисные мячики, которые упакованы внутри футбольного мяча. Чем их больше, и чем плотнее расположены, тем лучше эмбрион.
Данный параметр отражается буквами:
Оценивается также трофэктодермальный слой. Продолжая аналогию, можно сравнить его с кожей, из которой пошит футбольный мяч. Чем меньше сегментов (клеток), и чем плотнее они расположены, тем лучше.
Данный параметр тоже оценивается буквами латинского алфавита:
Соответственно, общая характеристика эмбриона отображается цифрой и двумя буквами. Например, запись 4АА означает, что эмбрион находится на стадии расширенной бластоцисты, внутри содержится много клеток, и снаружи его трофэктодерма тоже представлена большим количеством клеток.
Процесс развития эмбриона очень сложен. Процедура ЭКО считается удачно проведенной, если хотя бы 40% из них на пятый день развития достигли стадии бластоцисты хорошего качества.
Один или два эмбриона переносятся в матку. Остальные можно заморозить. Если текущий протокол ЭКО не завершится беременностью, их можно будет использовать в следующем цикле. В клинике ЭКО при заморозке используется метод витрификации, то есть сверхбыстрого замораживания, что позволяет защитить эмбрионы от повреждения кристаллами льда.
Оценка качества яйцеклеток и эмбрионов при ЭКО
Качество яйцеклеток и качество эмбрионов при ЭКО играет очень важную роль, значительно влияя на успешность применения этой репродуктивной технологии.
От качества взятых женских и мужских половых клеток и от того, как произошло оплодотворение, во многом зависит, будет ли попытка ЭКО неудачной или же наступит долгожданная беременность, которая приведет к рождению здорового ребенка. Поэтому технология экстракорпорального оплодотворения предусматривает оценку качества эмбрионов и яйцеклеток.
Как же определить качество яйцеклетки, и как проводится оценка качества эмбрионов?
Оценка качества яйцеклетки
Для успешного оплодотворения нужны зрелые яйцеклетки, которые будут способны взаимодействовать со сперматозоидом. Как правило, у молодых женщин достаточно хорошее качество ооцитов. Однако после 35 лет оно заметно ухудшается. Специальная гормональная стимуляция, проводящаяся перед забором яйцеклеток, позволяет ускорить их созревание. Однако даже после стимуляции ооциты могут оставаться недостаточно зрелыми и качественными.
Как проверить качество яйцеклетки?
Оценка ооцита проводится сразу после их забора из яичников женщины. При этом проверка качества яйцеклетки представляет собой визуальное наблюдение, которое осуществляется с помощью бинокулярного микроскопа.
Качество ооцитов определяется по внешнему виду цитоплазмы, вителлинового слоя, полярного тельца. При хорошем качестве — цитоплазма должна быть однородной, одного цвета и с отсутствием гранул. О плохом качестве яйцеклетки говорит присутствие вакуолей, темная окраска, гранулы, деформации.
Проверка качества яйцеклетки позволяет провести отбраковку наиболее некачественных экземпляров и тем самым выбрать наиболее подходящий для процедуры ЭКО генетический материал. Зрелый ооцит обозначают аббревиатурой MII.
Кроме того необходимо проверить качество спермы мужчины и на основе полученных результатов определить способ оплодотворения с применением технологии ЭКО или ИКСИ. Оба репродуктивных метода представляет собой оплодотворение «в пробирке», но в первом случае сперматозоиды должны самостоятельно оплодотворять яйцеклетки, а во втором — сперматозоид искусственно вводится в яйцеклетку.
Проверка качества эмбрионов в первые дни после оплодотворения
Качество эмбрионов впервые определяют через 18-20 часов после процедуры оплодотворения. В это время эмбриолог может сделать выводы, произошло ли нормальное оплодотворение, и образовалась ли зигота. Он определяет, присутствуют ли 2 пронуклеуса, оценивает их качество, симметричность, внешний вид.
На вторые сутки происходит дробление зиготы — появляются дочерние клетки — бластомеры. Качество бластомеров на этом этапе определяется по размерам, форме, также определяется степень фрагментации.
Если внутри эмбриона много бластомеров и низкая степень фрагментации (объем безъядерных элементов цитолазмы), то эмбрион считается качественным.
В эмбрионологии используется специальная классификация качества эмбрионов:
Также в этой классификации присутствуют цифры, указывающие на количество бластомеров. Чем больше цифра, тем лучше эмбрион.
На третий день в эмбрионе уже от 7 до 9 бластомеров. В этот период могут возникать «генетические поломки», приводящие к остановке развития эмбриона.
На четвертый день в зародыше уже присутствует 10-16 бластомеров.
На пятый день эмбрион переходит в стадию бластоциста.
Качество эмбрионов на стадии бластоцисты
На стадии бластоцисты у эмбриона уже появляется полость, которая достигает 50% от общего объема, и есть два типа клеток, которые образуют наружный и внутренний слои. Качество бластоцист определить очень важно, потому что именно на этой стадии происходит подсадка эмбриона в полость матки женщины.
На этой стадии эмбрион окружен оболочкой. После перемещения в матку эта оболочка разрывается и у бластоцисты появляется возможность прикрепиться к стенке матки.
Качество бластоцист определяется несколькими критериями: размер внутренней полости и степень проникновения эмбриона за оболочку, количество клеток и их плотность, состояние наружного слоя.
Размер внутренней полости определяет степень зрелости бластоцисты:
1 — если полость внутри эмбриона менее 50% от его объема (ранняя бластоциста);
2 — полость внутри эмбриона больше 50%;
3 — полость занимает весь объем эмбриона;
4 — полость увеличивается, а оболочка эмбриона становится тоньше;
5 — наружный слой бластоцисты проникает сквозь блестящую оболочку;
6 — бластоциста покидает оболочку.
Количество клеток и их плотность:
А — много плотно расположенных клеток.
В — среднее количество клеток внутри бластоцисты.
С — клеток внутри бластоцисты мало.
Состояние наружного слоя:
А — много клеток;
В — среднее количество клеток.
С — мало клеток.
Согласно этой классификации качество эмбрионов 4АА будет лучше, чем качество эмбрионов 2ВВ.
Бластоцисты 3АА, 4АА, 5АА, 6АА относят к эмбрионам хорошего качества. Бластоцисты 1АВ, 2ВВ и т.д. — среднего качества. Бластоцисты, в аббревиатуре которых есть «С» — плохое качество.
Чем выше будет качество эмбрионов при подсадке в матку, тем больше шансов будет, что процедура ЭКО окажется успешной.
Обычно во время процедуры выбирается 1 или 2 наивысшего качества эмбриона при подсадке в матку. Если было получено больше качественных эмбрионов, то «лишние» экземпляры замораживаются. Они могут быть использованы позже, если данный перенос не завершиться беременностью. При замораживании эмбрионов используется специальный метод быстрой заморозки, что позволяет сохранить их жизнеспособность.
Развитие эмбрионов
1 день. Оценка оплодотворения.
Спустя 16-18 часов после инсеминации (слияния полученных ооцитов и спермы) производится первая оценка оплодотворения. К этому времени эмбриолог видит сформировавшиеся пронуклеусы. На данном этапе происходит первая селекция – неоплодотворенные ооциты и аномальные зиготы изолируются от нормальных зигот.
Рис.1 Оплодотворенные яйцеклетки (пронуклеусы) – видны по два клеточных ядра.
2 день. Контроль развития эмбрионов.
Через 48 часов после получения ооцитов эмбриолог оценивает дробление эмбрионов, их морфологию (строение). Под морфологической оценкой понимают количество бластомеров (клеток) и аномалии цитоплазмы и ядра.
Идеальный эмбрион на 2 день должен иметь 4 равных по размеру одноядерных бластомеры без фрагментации.
Рис.2 Слева на картинке идеально сформированный эмбрион, состоящий из 4 бластомеров. Справа – строение нарушено, дальнейшее развитие прекратилось.
3 день. Контроль развития эмбрионов.
Через 72 часа после получения ооцитов производится оценка эмбрионов по следующим параметрам:
Количество бластомеров (клеток)- указывается цифра. В норме – 6-8 клеток.
На 3 день эмбриолог и лечащий врач могут принимать решение о сроке переноса эмбрионов. При переносе эмбрионов на 5 – день, на 3-й день все качественные эмбрионы переносятся в другую среду для культивирования до стадии бластоцисты.
Рис.3 Слева эмбрион отличного качества – оценка 8; Эмбрион по центру имеет небольшую фрагментацию – оценка 6 Sl Fr; Справа эмбрион сильно фрагментирован, подсчет бластомеров затруднен.
4 день. Дальнейшее культивирование эмбрионов.
К 4 дню процесс компактизации должен быть завершен, и эмбрион достигает стадии морулы.
Рис 4. Две отлично сформированные морулы.
5 день. Культивирование эмбрионов и перенос.
К этому времени эмбрион должен развиться до стадии бластоцисты. На основании морфологических признаков делается оценка возможности бластоцисты к дальнейшему развитию и принимается решение о ее пригодности к переносу в полость матки или витрификации (заморозке). Бластоцисты имеют цифровую и буквенную оценки.
Оценка степени развития бластоцисты и статуса хэтчинга (вылупления из оболочки):
1 – ранняя бластоциста: бластоцель меньше половины объема эмбриона (eBl);
2- бластоциста: бластоцель больше половины объема эмбриона (Bl 2);
3- полная бластоциста: бластоцель полностью заполняет эмбрион (Bl 3)$
4- экпандированная бластоциста: бластоцель полностью заполняет эмбрион, истончение зоны внешней оболочки (Bl 4 и Bl 5)
5- вылупляющаяся бластоциста: трофэктодерма начинает выступать их зоны вншней оболочки (Bl 5);
Оценка внутренне клеточной массы:
А – много плотно упакованных клеток;
B – несколько свободно сгруппированных клеток;
C – мало клеток, клетки плохо сгруппированы.
Оценка трофэктодермы:
А – много клеток, формирующих связанный эпителий;
В — несколько клеток, формирующих свободный эпителий;
C — несколько клеток серповидной формы.
Таким образом, эмбрион получает тройную оценку: BL 5АА
Оценка качества эмбрионов
Центральным звеном клиники ЭКО является эмбриологическая лаборатория. Для каждой попытки ЭКО заводится «Эмбриологический протокол», в котором отражается судьба каждого эмбриона от момента получения ооцитов и до момента переноса или замораживания.
Сразу после получения ооцитов и сперматозоидов производится их морфологическая оценка. По результатам анализа эякулята (спермограмме) принимают решение о способе оплодотворения – ЭКО или ИКСИ.
Описание: День 0. Непосредственно после пункции оценивают зрелость полученных ооцит-кумулюсных комплексов (ОКК). ОКК с прозрачным кумулюсом как правило содержит зрелый ооцит и получает оценку «1-1».При пункции возможно получение зрелых, незрелых, а также дегенеративных и разрушенных яйцеклеток. Точная оценка состояния ооцита возможна только после его очистки перед проведением ИКСИ.
В зрелых, готовых к оплодотворению ооцитах определяется первое полярное тельце. В эмбриологическом протоколе зрелый ооцит обозначают MII.
Если процесс созревания ооцита в фолликуле нарушен или неправильно введен триггер (ХГ), то существует большая вероятность получения незрелых клеток, обозначаемых – MI и GV (Рис.1). Возможна и полная дегенерация ооцита (Deg).
Через 18-20 часов после добавления сперматозоидов или ИКСИ (1-е сутки) при нормальном оплодотворении образуются два пронуклеуса. Это предшественники ядер будущих клеток-бластомеров, на которые начинает делиться оплодотворенная яйцеклетка. При правильном оплодотворении оба пронуклеуса четко различимы. В этом случае им присваивают оценку 2pN. Если пронуклеусов не видно, что обычно связано с отсутствием оплодотворения, в протокол записывается 0pN. При неправильном оплодотворении возможно появление нескольких пронуклеусов, что отражается в записи, например 3pN, 6pN и т.д.(Рис2). «Неправильно» оплодотворенные ооциты не пригодны для дальнейшей работы и утилизируются.
Рис 2. Первый день развития in vitro – формирование зиготы и образование пронуклеусов. А – 2pN (нормальное оплодотворение) – два пронуклеуса Б – 3pN (аномальное оплодотворение) – больше, чем два пронуклеуса.
Дальнейшее развитие эмбриона, дробление, происходит в течение пяти-шести дней. Оценка качества эмбрионов проводится через 40-42 часа (2 сутки), 72-74 часа (3 сутки) и 120 часов (5 сутки) после оплодотворения. Дробление эмбриона должно быть симметричным (получаются бластомеры одинакового размера) и равномерным (все бластомеры претерпевают деление). Для наглядности эмбриологи используют численно – буквенную систему оценки качества, где цифра означает количество бластомеров, а буква их качество. Для обозначения эмбриона хорошего качества используется буквенный индекс «А», среднего «B», низкого «С». Возможны и промежуточные варианты, например АВ, ВА, ВС, СВ, когда сложно дать однозначную оценку (Рис3).
2-й день (4А) 3-й день (8А) 4-й день (comp)
Рис 3. Дробление эмбриона в течение первых трех суток in vitro и компактная морула на 4-й день развития. Представлены эмбрионы отличного (А) качества. B – бластомер ZP – блестящая оболочка.
Рис 4. Дробление эмбриона в течение первых трех суток in vitro. Представлены эмбрионы хорошего (ВА, В) и удовлетворительного (ВС) качества. Во втором ряду эмбрионы с неравномерным дроблением (3Bun и 4BAun).
К концу третьих и на четвертые сутки культивирования эмбрион начинает компактизацию (границы его клеток становятся неразличимы) и готовится к образованию бластоцисты. Его клетки могут быть частично (p.comp) или полностью компактизованы (comp) (Рис.5). Обычно оценка эмбрионов на четвертые сутки не проводится ввиду малой информативности данной стадии развития. Однако наличие компактизации на вторые сутки может свидетельствовать об аномальном развитии и обязательно должна отражаться в эмбриологическом протоколе.
На пятые сутки, примерно через 120 часов после оплодотворения эмбрион образует бластоцисту (Bl) (Рис.6). Оценка качества бластоцист подразумевает ее размер, который отражается цифрами от 1 до 5; состояние внутренней клеточной массы (ВКМ) (от «A» до «С») и окружающих ее клеток – трофобласта (от «а» до «с»). Лучшими для переноса будут бластоцисты размера от 3 до 5, имеющие многоклеточную ВКМ и трофобласт – Bl4Aa, Bl4Ab. Бластоцисты среднего качества обозначаются как – Bl2Bb, Bl3Bb, а плохого – BlCc.
Рис 6. Бластоцисты на пятый день развития in vitro. e.bl – ранняя бластоциста, Bl3Ab – экспандированная бластоциста, Bl5Ab – бластоциста перед хетчингом, ВКМ – внутренняя клеточная масса.
Дальнейшее развитие эмбриона происходит уже в матке после имплантации. Для успешной имплантации бластоцисте необходимо выйти из окружающей ее блестящей оболочки. Данный процесс называется вылупление, или хетчинг. В случае, когда эмбриолог отмечает изменения блестящей оболочки и после криоконсервации эмбрионов процесс самостоятельного вылупления бластоцисты может быть затруднен и его возможно облегчить применяя вспомогательный хетчинг. В нашем центре мы используем наиболее эффективный лазерный вспомогательный хетчинг.
Самая высокая частота оплодотворения получена при переносе эмбрионов на стадии бластоцисты. Так, в нашем центре она составляет 53%. В то время, как при переносе на стадии 6-8 бластомеров – 47%.
Замораживание и ПГД также лучше всего выполнять на стадии бластоцисты. Однако, не все эмбрионы доходят до бластоцисты. Поэтому общепринятым считается следующий подход: если на 5 день культивирования имеется меньше 5 эмбрионов, как минимум один переносят, остальные оставляют до 5 дня. Из достигших бластоцисты еще один может быть перенесен (двойной перенос), остальные замораживают. Если на 3 день эмбрионов 5 и больше, их не переносят и оставляют культивировать до 5 дня. На 5 день одну, реже две бластоцисты переносят, остальные замораживают.
В заключение следует отметить, что описываемые морфологические критерии оценки качества эмбрионов являются основными, необходимыми, но не всегда достаточными для выбора эмбриона для переноса. Так, нередко после переноса эмбрионов высшего качества имплантация не наступает и, наоборот, бывают случаи наступления и успешного развития беременности при переносе эмбрионов плохого качества. Поэтому существуют дополнительные способы прогноза имплантации эмбриона (time-laps, ПГС, анализ метаболитов и др.), которые дополняют морфологические критерии и обеспечивают в совокупности выбор лучшего эмбриона.
Бластоциста в процессе хетчинга (выхода из блестящей оболочки для имплантации)
Оценка качества эмбрионов
Центральным звеном клиники ЭКО является эмбриологическая лаборатория. Для каждой попытки ЭКО заводится «Эмбриологический протокол», в котором отражается судьба каждого эмбриона от момента получения ооцитов и до момента переноса или замораживания.
Сразу после получения ооцитов и сперматозоидов производится их морфологическая оценка. По результатам анализа эякулята (спермограмме) принимают решение о способе оплодотворения – ЭКО или ИКСИ.
Описание: День 0. Непосредственно после пункции оценивают зрелость полученных ооцит-кумулюсных комплексов (ОКК). ОКК с прозрачным кумулюсом как правило содержит зрелый ооцит и получает оценку «1-1».При пункции возможно получение зрелых, незрелых, а также дегенеративных и разрушенных яйцеклеток. Точная оценка состояния ооцита возможна только после его очистки перед проведением ИКСИ.
В зрелых, готовых к оплодотворению ооцитах определяется первое полярное тельце. В эмбриологическом протоколе зрелый ооцит обозначают MII.
Если процесс созревания ооцита в фолликуле нарушен или неправильно введен триггер (ХГ), то существует большая вероятность получения незрелых клеток, обозначаемых – MI и GV (Рис.1). Возможна и полная дегенерация ооцита (Deg).
Через 18-20 часов после добавления сперматозоидов или ИКСИ (1-е сутки) при нормальном оплодотворении образуются два пронуклеуса. Это предшественники ядер будущих клеток-бластомеров, на которые начинает делиться оплодотворенная яйцеклетка. При правильном оплодотворении оба пронуклеуса четко различимы. В этом случае им присваивают оценку 2pN. Если пронуклеусов не видно, что обычно связано с отсутствием оплодотворения, в протокол записывается 0pN. При неправильном оплодотворении возможно появление нескольких пронуклеусов, что отражается в записи, например 3pN, 6pN и т.д.(Рис2). «Неправильно» оплодотворенные ооциты не пригодны для дальнейшей работы и утилизируются.
Рис 2. Первый день развития in vitro – формирование зиготы и образование пронуклеусов. А – 2pN (нормальное оплодотворение) – два пронуклеуса Б – 3pN (аномальное оплодотворение) – больше, чем два пронуклеуса.
Дальнейшее развитие эмбриона, дробление, происходит в течение пяти-шести дней. Оценка качества эмбрионов проводится через 40-42 часа (2 сутки), 72-74 часа (3 сутки) и 120 часов (5 сутки) после оплодотворения. Дробление эмбриона должно быть симметричным (получаются бластомеры одинакового размера) и равномерным (все бластомеры претерпевают деление). Для наглядности эмбриологи используют численно – буквенную систему оценки качества, где цифра означает количество бластомеров, а буква их качество. Для обозначения эмбриона хорошего качества используется буквенный индекс «А», среднего «B», низкого «С». Возможны и промежуточные варианты, например АВ, ВА, ВС, СВ, когда сложно дать однозначную оценку (Рис3).
2-й день (4А) 3-й день (8А) 4-й день (comp)
Рис 3. Дробление эмбриона в течение первых трех суток in vitro и компактная морула на 4-й день развития. Представлены эмбрионы отличного (А) качества. B – бластомер ZP – блестящая оболочка.
Рис 4. Дробление эмбриона в течение первых трех суток in vitro. Представлены эмбрионы хорошего (ВА, В) и удовлетворительного (ВС) качества. Во втором ряду эмбрионы с неравномерным дроблением (3Bun и 4BAun).
К концу третьих и на четвертые сутки культивирования эмбрион начинает компактизацию (границы его клеток становятся неразличимы) и готовится к образованию бластоцисты. Его клетки могут быть частично (p.comp) или полностью компактизованы (comp) (Рис.5). Обычно оценка эмбрионов на четвертые сутки не проводится ввиду малой информативности данной стадии развития. Однако наличие компактизации на вторые сутки может свидетельствовать об аномальном развитии и обязательно должна отражаться в эмбриологическом протоколе.
На пятые сутки, примерно через 120 часов после оплодотворения эмбрион образует бластоцисту (Bl) (Рис.6). Оценка качества бластоцист подразумевает ее размер, который отражается цифрами от 1 до 5; состояние внутренней клеточной массы (ВКМ) (от «A» до «С») и окружающих ее клеток – трофобласта (от «а» до «с»). Лучшими для переноса будут бластоцисты размера от 3 до 5, имеющие многоклеточную ВКМ и трофобласт – Bl4Aa, Bl4Ab. Бластоцисты среднего качества обозначаются как – Bl2Bb, Bl3Bb, а плохого – BlCc.
Рис 6. Бластоцисты на пятый день развития in vitro. e.bl – ранняя бластоциста, Bl3Ab – экспандированная бластоциста, Bl5Ab – бластоциста перед хетчингом, ВКМ – внутренняя клеточная масса.
Дальнейшее развитие эмбриона происходит уже в матке после имплантации. Для успешной имплантации бластоцисте необходимо выйти из окружающей ее блестящей оболочки. Данный процесс называется вылупление, или хетчинг. В случае, когда эмбриолог отмечает изменения блестящей оболочки и после криоконсервации эмбрионов процесс самостоятельного вылупления бластоцисты может быть затруднен и его возможно облегчить применяя вспомогательный хетчинг. В нашем центре мы используем наиболее эффективный лазерный вспомогательный хетчинг.
Самая высокая частота оплодотворения получена при переносе эмбрионов на стадии бластоцисты. Так, в нашем центре она составляет 53%. В то время, как при переносе на стадии 6-8 бластомеров – 47%.
Замораживание и ПГД также лучше всего выполнять на стадии бластоцисты. Однако, не все эмбрионы доходят до бластоцисты. Поэтому общепринятым считается следующий подход: если на 5 день культивирования имеется меньше 5 эмбрионов, как минимум один переносят, остальные оставляют до 5 дня. Из достигших бластоцисты еще один может быть перенесен (двойной перенос), остальные замораживают. Если на 3 день эмбрионов 5 и больше, их не переносят и оставляют культивировать до 5 дня. На 5 день одну, реже две бластоцисты переносят, остальные замораживают.
В заключение следует отметить, что описываемые морфологические критерии оценки качества эмбрионов являются основными, необходимыми, но не всегда достаточными для выбора эмбриона для переноса. Так, нередко после переноса эмбрионов высшего качества имплантация не наступает и, наоборот, бывают случаи наступления и успешного развития беременности при переносе эмбрионов плохого качества. Поэтому существуют дополнительные способы прогноза имплантации эмбриона (time-laps, ПГС, анализ метаболитов и др.), которые дополняют морфологические критерии и обеспечивают в совокупности выбор лучшего эмбриона.
Бластоциста в процессе хетчинга (выхода из блестящей оболочки для имплантации)
Скидка 50% на первичный прием репродуктолога
Заполнив анкету для будущих родителей, вы сэкономите время врача на первичном приеме, поэтому он будет для вас стоить 50% от обычной цены.